Efeitos do ácido all-trans-retinóico na proliferação, diferenciação, indução de apoptose e expressão gênica em células tronco mesenquimais humanas - Schweich, Laynna de Carvalho (2017)
O ácido all-trans-retinóico (ATRA), é conhecido com uma das formas mais ativas da vitamina A, que participa da regulação da proliferação, diferenciação e apoptose de diversos tipos celulares. Este metabólito possui influência direta sobre a biologia dos adipócitos, atuando no processo de emagrecimento por meio da redução dos processos de adipogênese e lipogênese. O propósito desta pesquisa foi avaliar o efeito do ATRA na diferenciação in vitro das células-tronco mesenquimais (CTM) humanas em adipócitos bem como a indução de apoptose ao longo desse processo. Para essa avaliação, as células foram submetidas a tratamento com ATRA, nas concentrações de 0,5, 5, 50 e 100μM, por 24, 48 e 72 horas. Depois a IC50 (20.75 μM) foi estabelecida e usada para tratamentos de 7 dias sendo as culturas de CTM, CTM induzida a diferenciação por 7 dias e CTM induzida à diferenciação por 14 dias. Para os ensaios de citometria de fluxo e de expressão gênica foi utilizada a IC50 em tratamentos de 12h. Verificou-se que as concentrações de 20.75, 50 e 100μM causam redução significativa da viabilidade celular, tanto em CTM como em células induzidas à diferenciação adipogênica o que sugere efeito citostático/citotóxico. Quando avaliado o ciclo celular observou-se que o ATRA aumentou a frequência de células em Sub-G1em 4,02x e reduziu a frequência de células em G1 em 2,54x. Observou-se ainda que a perda da integridade da membrana aumentou em 4,66x nas culturas tratadas com a ATRA. Já os eventos de apoptose aumentaram 33,56x. O ensaio de expressão gênica sugere que o tratamento com ATRA leva à permeabilização da membrana mitocondrial e consequente liberação de moléculas pró-apoptóticas BAK e BAX (aumento da expressão de 5,5 e 5,4x, respectivamente), e aumento da expressão de CASP3 (8,8x). Estes eventos podem ativar a expressão de Bcl-2 (aumento de 4,1x), GADD45 (aumento 3,14x) e PPAR- γ (aumento de 16x) bem como reduzir a expressão de P53 (-1,38x). Sugere-se ainda que esses eventos são mediados pelo aumento da expressão do RARα (3,8x). Diante do exposto infere-se que o ATRA pode ser uma boa estratégia para o desenvolvimento de terapias para o controle da obesidade visto que ele interfere na diferenciação e morte celular de CTM, pré-adipócitos e adipócitos.