Caracterização da atividade de moléculas solúveis da hemolinfa de Biomphalaria tenagophila Taim envolvidos na morte dos esporocistos de Schistosoma mansoni cultivados in vitro - Cintia Aparecida de Jesus Pereira (2009)
As espécies Biomphalaria glabrata, B. tenagophila e B. straminea são Planorbideos de água doce com importância médica relevante no Brasil, pois são os hospedeiros intermediários naturais de Schistosoma mansoni. Biomphalaria tenagophila oriunda da reseva ecológica doTaim (RS), é uma linhagem completamente resistente a infecção pelo parasito, sendo capaz de destruií-lo poucas horas após a penetração do miracídio no interior do molusco, embora o mecanismo de lesão não sejam conhecido. Apesar dos trabalhos mostrarem que, entre oselementos do sistema interno de defesa dos moluscos, os hemócitos são os principais efetores no processo de eliminação do parasito, trabalhos preliminares demonstraram que a inoculação da fração acelular da hemolinfa de B. tenagophila Taim resistente resulta no aumento da resistência de B. tenagophila Cabo Frio suscetível a infecção pelo S. mansoni, indicado que fatores solúveis da hemolinfa também participam do mecanismo de proteção da resposta protetora desenvolvida pelo molusco. Neste trabalho foi possível confirmar a participação da fração acelular da hemolinfa de B. tenagophila Taim na destruição de esporocistos de S. mansoni em sistema de cultivo do parasito in vitro. Neste sistema, a adição de hemolinfa acelular, especialmente a de Taim, às culturas de esporocisto de S. mansoni resulta em aumento da mortalidade dos esporocistos quando comparado às culturas de esporocistos contendo apenas meio CBSS suplementado ou meio e hemolinfa acelular de B. glabrata. Alem da ação direta sobre esporocistos, a acombinação da fração acelular de Taim com os hemócitos de B.tenagophila de Cabo Frio aumenta significativamente a mortalidade dos esporocistos e o efeito é espécie-especifico. Assim, os dados aqui apresentados indicam que ahemolinfa acelular de caramujos da linhagem Taim atua diretamente na destruição dos esporocistos provocando lesão de tegumento do parasito que permitiu a penetração do XIV marcador fluorescente, Hoechst 33258, e indiretamente auxiliando os granulócitos noreconhecimento do parasito. O mecanismo pelo qual a fração acelular da hemolinfa de B .tenagophila Taim destroe o parasito, sem a aprticipação dos hemócitos, não está definido na literatura. Há evidências da presença de atividade de proteases na hemolinfa de Biomphalaria, embora nenhum estudo tenha sido conduzido para evidenciar a participação de aividade protease na interação entre B.tenagophila infectado com S. mansoni. Neste trabalho também foi avaliado a participação de proteases presentes na hemolinfa de B.tenagophila Taim e sua associação no processo de destruição dos esporocistos de S. mansoni. Nososo dados mostram atividade proteólitca, especialmente serino- e cisteino-protease na hemolinfa de todas as linhagens de caramujos testadas neste trabalho experiemental, porém a atividade encontrada na hemolinfa deB.tenagophila Taim é mais intensa. Além disto a inibição da atividade de serino-protease na hemolinfa de B.tenagophila Taim resultou em diminuição significativa da mortalidade dos esporocistos de S. mansoni quando comparado com tratamento no qual a atividade proteolítica da fração acelular B. tenagophila Taim não foi inibida. O fracionamento dahemolinfa acelular de B. tenagophila Taim em coluna de exclusão molecular permitiu identificar que a atividade anti-esporocisto está associada a componentes protéicos da fração 7 e é coincidente com a atividade de serino-protease presente nesta amostra. Separaçõessubseqüentes da fração 7 em coluna de troca iônica, demonstram atividade anti-esporocisto presente na subfração 7.1 e 7.2, sendo que na subfração 7.1 a atividade anti-esporocisto é independente de serino-protease, e na subfração 7.2 a mortalidade e lesão tegumentar de esporocistos de S. mansoni coincide com a atividade proteolítica. Os resultados sugerem que a atividade anti-esporocisto presente na hemolinfa de B.tenagophila Taim esta associada com a capacidade de lesar diretamente esporocistos de S. mansoni na ausência de hemócitos