Estudo de doze sorovares de Bacillus thuringiensis: curva de crescimento, determinação da presença de genes CRY 4 A/B e variabilidade genômica - Bernadete de Souza Santos (2000)
Entre as bactérias do gênero Bacillus algumas espécies destacam-se como controladores biológicos microbianos de insetos vetores e pragas, dentre estas destaca-se o Bacillus thuringiensis, bactéria de solo, aeróbia e gram-positiva. Suas características tóxico/específicas para larvas de inseto, a sua inocuidade para o homem e outros mamíferos vertebrados, bem como fauna e flora, estão relacionadas com endotoxina, corpo paraesporal protético intracitoplasmático, denominado ä-endotoxina, produzido durante a fase de esporulação das bactérias. No presente estudo, avaliou-se a atividade larvicida de 12 sorovares de Bacillus thuringiensis, KYU, BRA, OSW, NIG, TOU, KUR, THO, MOR, CAN, DAR, OST e ISR contra tres espécies de mosquitos: Aedes aegypti, Aedes fluviatilis & Culex quinquefasciatus, bem como foram realizadas curvas de crescimento dos referidos sorovares com o intuito de observar o comportamento das bactérias. Também foram realizados PCR com iniciadores específicos para determinação da presença de genes Cry4A/B de Bti e variabilidade genômica observadas por AP-PCR. Os resultados da atividade larvicida mostraram diferenças significativas para as tres espécies de mosquitos estudadas. As larvas de Aedes aegypti foram susceptíveis a somente ao controle positivo, entretanto as larvas de Aedes fluviatilis apresentaram taxas de mortalidade para os sorovares KUR, KYU enquanto que, as larvas de Culex quinquefasciatus foram 100% sensíveis ao sorovar DAR. Nas curvas de crescimento os sorovares apresentam comportamento semelhante, iniciando a esporulação em 32 horas de crescimento, exceto para o MOR, que iniciou sua esporulação em 24 horas de crescimento. O tempo de crescimento para estas bactérias ficou estimado em 0,50 hora e a velocidade de crescimento foi de 1,381 horas-1 A técnica de PCR para amplificação dos genes cry4A/B mostrou um produto já esperado de 439bp para o sorovar ISR. A reação de AP-PCR apresentou produtos (RAPD), que foram equacionados utilizando-se a fórmula de DICE (1945), para estabelecer coeficientes de similaridade entre referidos sorovares. Através de fenograma, pode-se concluir um percentual de similaridade entre os bacilos partindo da linha de fenon. Os sorovares de maior coeficiente de similaridade foram NIG e KYU aproximadamente 92% de similaridade. Enquanto que, os sorovares MOR e o KUR apresentaram-se isolados no fenograma. ISR aparece mais próximo do sorovar OST e as duas variedades nacionais BRA e OSW mostram um coeficiente de similaridade em torno de 65%.