Fenótipo e atividade de síntese de condrócitos articulares de ratos neonatos em cultura bi ou tridimensional com diferentes concentrações de etanol - Natalia Viana Tamiasso (2020)
Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes concentrações de etanol sobre o fenótipo e atividade de síntese de condrócitos articulares de ratos neonatos em cultura bidimensional e tridimensional. Os condrócitos foram cultivados em meio condrogênico com diferentes concentrações de etanol: 0,0%v/v (controle); 0,05%v/v (8,6mM); 0,25%v/v (42,9 mM), e 0,5%v/v (85,7 mM). Após 7, 14 e 21 dias, os condrócitos sob cultura bidimensional foram submetidos aos testes do MTT e da atividade de fosfatase alcalina (FA). Após 21 dias de cultivo, os pellets de condrócitos, sob cultura tridimensional, foram processados pela técnica de inclusão em parafina e secções histológicas foram coradas pelo ácido periódico de Schiff (PAS) para avaliação do diâmetro médio dos condrócitos e da porcentagem de células, núcleo, citoplasma e de matriz bem diferenciada. Foi também avaliada a porcentagem de áreas PAS+. Aos 21 dias, foi também avaliada a expressão dos transcritos gênicos para agrecan, Sox9 e colágeno II, pela técnica de RT-qPCR. Não houve diferença significativa entre grupos pelo ensaio do MTT. Mas, condrócitos cultivados com 0,25%v/v ou 0,5%v/v de etanol apresentaram redução significativa da atividade da FA aos 21 dias de cultivo. A coloração de PAS revelou que os pellets de condrócitos tratados com 0,5% v/v de etanol apresentaram maior porcentagem de citoplasma e de núcleo de condrócitos, mas com redução das áreas de matriz PAS+. Mas, neste grupo o tamanho dos condrócitos foi semelhante aos demais grupos. A expressão de agrecan no grupo tratado com 0,5% v/v de etanol foi significativamente menor em comparação ao controle. Nos grupos tratados com 0.25%v/v e 0.5%v/v de etanol, além da atividade da fosfatase alcalina, a porcentagem de cartilagem madura também foi significativamente menor em comparação ao controle. O grupo tratado com 0,05%v/v de etanol foi semelhante ao controle em todos os parâmetros avaliados. Conclui-se que o etanol atua diretamente sobre os condrócitos articulares de neonatos, alterando o fenótipo do condrócito e a sua atividade de síntese de matriz extracelular, com redução da atividade da fosfatase alcalina, da síntese de matriz diferenciada e de matriz PAS+ e da expressão do transcrito gênico para agrecan, sendo estes efeitos dose-dependentes.