Staphylococcus aureus e staphylococcus chromogenes associados a vacas leiteiras: avaliação imunometabólica na relação macrófago-bactéria em uma abordagem in vitro - Sarah Antonieta de Oliveira Veríssimo (2022)
A mastite causa grandes impactos na saúde única devido aos prejuízos socioeconômicos, ambientais e problemas de saúde pública. Desse modo, aumentam-se os gastos em tratamentos, mão-de-obra, reduz-se a produção leiteira, além da perda precoce do animal e diminuição do preço pago pela qualidade do leite. O objetivo desse trabalho foi avaliar como distintos isolados de estafilococos associados a bovinos modulam o imunometabolismo de células macrofágicas da linhagem RAW 264.7 em uma infecção experimental in vitro e como essas induzem a expressão de PD-1 e PDL-1 numa relação macrófago-bactéria. Para tal usamos quatro isolados, dois de S. aureus (um de nicho extramamário – SN/spa t098; e um originário de infecção intramamária persistente – IM/spa t605) e dois de S. chromogenes (um obtido a partir do ápice do teto de uma novilha - TA; e outro originário de infecção intramamária persistente - IM). A produção de óxido nítrico (NO) foi mediada pela Reação de Griess e a expressão dos genes iNOS, arginase, NLRP3, IL-1β, IL-18, Bax, Bcl2, IDO e Cat-2B foram avaliadas por qPCR. Além disso, a expressão do receptor de morte programada-1 (PD-1) e seu ligante (PD-L1) e a viabilidade celular foram determinadas por citometria de fluxo. Os testes estatísticos usados foram Kruskal Wallis para os dados de qPCR, teste de Friedman para produção de NO e teste Duncan para os dados de citometria de fluxo. Verificou-se que os isolados de estafilococos modulam o imunometabolismo de células RAW 264.7 de formas distintas. A expressão relativa do gene iNOS foi maior durante a infecção por isolados distintos de estafilococos quando comparados com o controle, enquanto a expressão relativa do gene arginase foi maior do que o controle apenas com S. aureus com infecção de 180 min. A produção de NO foi inibida em macrófagos com infecção de S. aureus IM e esse composto foi degradado na infecção de S. chromogenes TA. Na infecção com todos os estafilococos foi observada ativação do inflamassoma, mas em nenhuma houve a expressão de mRNA de IL-18. A expressão do gene pró-apoptótico Bax foi maior por S. chromogenes IM com infecção de 90 min. Já para Bcl2, um gene anti-apoptótico, foi observada maior expressão desse gene em macrófagos infectados com S. aureus SN aos 180 min. Devido à baixa qualidade da curva de dissociação e altos valores de Ct na análise de qPCR, a expressão de IDO e Cat-2B não foi avaliada. Uma porcentagem maior de macrófagos que expressam PD-1 em células RAW 264.7 foi observada durante a infecção por estafilococos independentemente do isolado estudado, indicando mecanismos de evasão desses isolados. Em relação a PD-L1, apenas S. aureus IM levou à indução de um discreto aumento na porcentagem de macrófagos que expressam esse gene em relação ao controle (basal). O GMFI de PD-1 foi associado positivamente com a multiplicidade da infecção, enquanto não houve efeito sobre GMFI de PD-L1.