Identificação e avaliação de eficácia de antígenos vacinais contra o carrapato estrela (Amblyomma sculptum) - Gabriel Cerqueira Alves Costa (2019)
Amblyomma sculptum, carrapato da família Ixodidae, é uma espécie amplamente distribuída no Brasil e a única espécie do complexo Amblyomma cajennense descrita na região sudeste. É o mais importante vetor de Rickettsia rickettsii, causadora da febre maculosa brasileira (FMB) e também relacionado a prejuízos econômicos na produção pecuária. Proteínas salivares e do intestino médio, expressas por carrapatos, desempenham um papel importante na alimentação e digestão de sangue. As proteínas salivares secretadas no sítio alimentar estão envolvidas em vários processos, como hemostasia e modulação da resposta imune, enquanto as proteínas expressas no intestino médio estão envolvidas na digestão da dieta, bem como na proteção do epitélio. Muitos genomas e transcriptomas das glândulas salivares e intestino médio de carrapatos têm sido produzidos nos últimos anos, abrindo novas possibilidades de estudos, já que a identificação e caracterização de novas proteínas salivares e intestinais altamente expressas durante o repasto sanguíneo do carrapato poderiam indicar quais apresentam maior importância para a biologia do parasito, podendo ser utilizadas como antígenos em futuras formulações vacinais. No presente estudo, o objetivo principal foi selecionar proteínas salivares e intestinais do carrapato A. sculptum e avaliar sua eficácia como antígenos vacinais. Dessa forma, foram selecionadas sequências codificadoras de proteínas salivares altamente expressas e relacionadas ao processo alimentar. Além disso, proteínas intestinais de membrana também foram selecionadas pelo seu nível de antigenicidade e seus epitopos preditos para células B foram ranqueados a fim de se construir uma proteína quimérica. Três proteínas salivares foram selecionadas e expressas de forma recombinante em bactérias: uma proteína de 8,7 kDa com um domínio de kunitz (rAsKunitz), uma proteína de 9,8 kDa relativa à família 8,9 kDa (rAs8.9kDa), exclusiva de carrapatos e uma proteína de 16,8 kDa identificada como uma Basic tail (rAsBasicTail). Seus recombinantes foram testados para investigar propriedades anticomplemento e anticoagulantes. Os ensaios realizados revelaram que todos eles foram capazes de inibir as vias clássica e alternativa do complemento. A rAsBasicTail foi o inibidor mais eficaz contra o fXa da cascata de coagulação e a tripsina, em comparação com outros recombinantes. Por outro lado, rAsKunitz apresentou inibição da trombina, com o melhor desempenho entre os recombinantes. Além das proteínas recombinantes salivares, uma recombinante quimérica foi construída com 22 epitopos de sete proteínas intestinais de membrana. As recombinantes salivares, intestinais e a proteína quimérica foram utilizadas para imunizar camundongos e testadas como antígenos vacinais contra a infestação de A. sculptum. A maior taxa de mortalidade foi observada em fêmeas alimentadas em camundongos tratados com rAs8.9kDa e rAsKunitz (58,3% e 41,6%, respectivamente), enquanto a mortalidade de ninfas alimentadas em camundongos imunizados com rAs8.9kDa, rAsBasicTail e rAsQuimera foi de 100%. A eficácia dos antígenos salivares rAs8.9kDa e rAskunitz foi de 92,89% e 85,32%, respectivamente, enquanto a proteína quimérica foi o antígeno intestinal com maior taxa de eficácia, 80,84%. Estes dados indicam que os alvos selecionados poderiam ser utilizados como parte de uma formulação vacinal. Além disso, pudemos acrescentar algumas novas informações sobre as moléculas salivares envolvidas no processo hematofágico, aumentando a compreensão sobre a fisiologia de A. sculptum.