Biotecnologia de phage display aplicada para o desenvolvimento de uma vacina contra as leishmanioses e novas plataformas de diagnóstico sorológico - Lourena Emanuele Costa (2016)
As leishmanioses são doenças que apresentam uma elevada incidência no Brasil. Em modelos murinos, após a cura da doença causada por Leishmania major, os animais adquirem imunidade duradoura contra a reinfecção. Tal fato tem estimulado a realização de trabalhos objetivando o desenvolvimento de vacinas que possam atuar como uma medida efetiva de controle da doença. Com o avanço das ferramentas biotecnológicas, a pesquisa por novos antígenos, mais refinados, vem se mostrando como uma boa perspectiva para o desenvolvimento de novos produtos. A tecnologia de phage display baseia-se na expressão de peptídeos exógenos na superfície externa de clones de bacteriófagos (fagos) e permite a seleção daqueles que apresentam elevada especificidade para uma molécula alvo. Neste projeto, a técnica de phage display foi utilizada com a finalidade de se selecionar fagos que expressam peptídeos com elevada reatividade frente aos anticorpos IgG purificados de soros de cães com leishmaniose visceral (LV) sintomática e assintomática a fim de desenvolver uma vacina. Vinte clones de fagos foram selecionados após três ciclos de bio-pannings e foram avaliados por meio de ensaios in vitro de imunoestimulação de esplenócitos obtidos de camundongos BALB/c sadios ou cronicamente infectados com Leishmania infantum. Os clones que foram capazes de induzir a uma resposta imune Th1 polarizada, representada por níveis elevados de IFN- e baixos níveis de IL-4; foram selecionados. Por critérios de seletividade e especificidade, dois clones (B10 e C01) foram utilizados nos protocolos de vacinação. Camundongos BALB/c vacinados com os clones mais saponina apresentaram uma produção elevada de IFN-, IL-12, e GM-CSF após a estimulação específica in vitro. Após a infecção, esses animais apresentaram reduções significativas na carga parasitária no fígado, baço, medula óssea e linfonodos drenantes, em comparação aos grupos controles (PBS, saponina e fago selvagem mais saponina). Estes dois mimotopos de Leishmania infantum também foram testados contra a infecção por L.amazonensis a fim de verificar a proteção cruzada-heteróloga entre espécies. Os imunógenos B10 e C01 juntos e separados; com e sem adjuvantes típicos de resposta imune Th1 (saponina), foram usados no experimento. Ambos os clones induziram uma produção de IFN-, IL-12 e GMC-SF. Reduziram a carga parasitária das patas, fígado, baço, linfonodos drenantes e medula óssea. Em ambos os trabalhos a proteção foi associada com a produção de IFN-, dependente de IL-12, mediada principalmente por células T CD8+. Estes animais apresentaram também a predominância de anticorpos IgG2a específicos dos parasitas. Dessa forma, o presente trabalho descreve a seleção e identificação de dois clones de bacteriófagos expressando peptídeos de interesse e sua aplicação como candidatos à vacina contra as leishmanioses.