Padronização e aplicação da PCR multiplex na tipificação de Clostridium perfringens isolados de suínos diarréicos - Andrea Amelia Silva Vieira (2006)
Foi realizada a padronização de um ensaio de PCR Multiplex, para tipificação de Clostridium perfringens a partir de fezes de leitões com diarréia utilizando iniciadores científicos para os genes das toxinas alfa (cpa), beta (cpb), beta 2 (cpb2), épsilon (etx), iota (iA) e enteroxina (cpe). Setenta amostras fecais de leitões com diarréia variando entre sete a 36 dias de idade foram utilizadas. Colônias sugestivas de C. prefringens em Agar sangue foram submetidas à coloração de Gram e identificação bioquímica. Os extratos de DNA para amplificação da PCR foram obtidos por lise direta de uma colônia isolada. Não foi realizada purificação de DNA. Bacilos anaeróbicos Gram positivo forma isolados de 59 das 70 amostras fecais testadas. Dentre estas, 27 foram identificadas como C. perfringens e tipificadas pelo PCR Multiplex. Vinte e uma eram do tipo A e cinco destas apresentavam o gene cpb2. Cinco eram do tipo C e quatro destas apresentavam o gene cpb2. Uma era do tipo D. Nenhuma amostra foi positiva para o gene iA e cpe. O ensaio de PCR usado neste estudo foi apropriado para tipificação de C. perfringens. Este estudo demonstrou que o tipo A é a amostra mais prevalente de C. perfringens em fezes de leitões com diarréia.