Vias de sinalização de proteínas MAPKS em Schistosoma mansoni - Sandra Grossi Gava (2017)
A identificação e caracterização dos mecanismos e moléculas envolvidos em sinalização celular são essenciais para o entendimento da biologia parasitária de S. mansoni. Proteínas quinases desempenham papel chave em vias de sinalização e têm sido propostas como potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas. O genoma de S. mansoni codifica 252 proteínas quinases eucarióticas (ePKs), entretanto, apenas 32 possuem alguma evidência funcional experimental. Nosso grupo demonstrou por estudos funcionais que MAPKs estão envolvidas no desenvolvimento, reprodução e/ou sobrevivência do parasito e podem, portanto, serem consideradas alvos potenciais para o desenvolvimento e reprodução de S. mansoni. Para isso, as ePKs em S. mansoni, o presente trabalho tem como motivação ´principal contribuir para sua caracterização experimental correlacionando dados de expressão com o desenvolvimento de novas drogas. Em virtude da escassez de dados sobre a função das ePKs em S. mansoni, o presente trabalho tem como motivação principal contribuir para sua caracterização experimental correlacionando dados de expressão com o desenvolvimento e reprodução de S. mansoni. Para isso, as ePKs SmCaMK2, SmERK-1, SmERK-2, SmJNK e Smp38 foram silenciadas em esquistossômulos por RNA de interferência, incluindo três réplicas biológicas. Após dois dias foi realizada a extração de RNA total e a avaliação dos níveis de transcrição por RT-qPCR. Para todos os genes, com exceção de SmERK-2, foi observada uma redução média de 75% nos níveis de transcrito dos alvos silenciados. O RNA extraído foi utilizado para construção de bibliotecas do tipo fragmentado, sequenciadas na plataforma Illumina HiSeq 2500. As sequências obtidas foram mapeadas na última versão do genoma de referência de S. mansoni e os genes diferencialmente expressos (DEGS) foram identificados pela comparação das amostras de parasitos expostos aos dsRNAs específicos em relação aos parasitos não tratados. Foram identificados 606 DEGs em esquistossômulos SmJNK knockdown e 1154 DEGs em esquistossômulos Smp38 knockdown. Grande parte dos DEGs (505) encontrados codificam proteínas ainda sem função conhecida. O silenciamento de SmJNK promove diminuição de expressão de genes relacionados à defesa antioxidante, à composição estrutural de ribossomos e do citoesqueleto e dos spliceossomos. O silenciamento de Smp38 MAPK promove diminuição da expressão de genes relacionados à defesa antioxidante, à composição estrutural de ribossomos e do citoesqueleto e dos spliceossomos. O silenciamento de Smp38 MAPK promove diminuição da expressão de genes relacionados à composição estrutural de ribossomos, do citoesqueleto, dos spliceossomos e dos fagossomos, além da diminuição da expressão de genes das vias de fosforilação oxidativa e metabolismo de purinas. Este trabalho possibilitou uma melhor compreensão das vias de sinalização de SmJNK e Smp38, elucidando papéis funcionais dessas MAPKs e dos alvos por elas regulados.