Proteômica diferencial em plantas transgênicas de Nicotiana benthamiana e testes da resistência em Solanum tuberosum induzida pelo mesmo gene contra Pectobacterium atrosepticum - Costa, Laura Santos Martins (2019)
O gene sintético DomB, isolado da fração da apirase de batata (Solanum tuberosum), apresenta atividade antigênica em animais e confere resistência a plantas de fumo (Nicotiana benthamiana) à infecção bacteriana por Pectobacterium atrosepticum. No presente trabalho, propusemos a análise proteica diferencial em plantas de Nicotiana benthamiana geneticamente modificadas com o gene sintético g2S2-6His-DomB por nanoUPLC-MSE. Para esse fim, comparamos o conteúdo proteico da progênie hemizigótica R0 de N. benthamiana modificadas geneticamente com o gene ao conteúdo proteico de N. benthamiana selvagem, e desses grupos desafiados com P. atrosepticum. Além disso, propusemos a avaliação da atividade do mesmo gene em S. tuberosum via agroinfiltração. A partir da análise das proteínas tripsinizadas, os resultados sugerem que ocorre a produção de proteínas possivelmente ligadas à sinalização de defesa quando as plantas são submetidas à um desafio com uma fitobactéria, porém devido ao baixo número de identificações, temos como perspectiva repetir os experimentos com um maior número de réplicas. As análises preliminares com a cultivar comercial Solanum tuberosum cv. Asterix da expressão transiente do mesmo gene sintético pelo método de infiltração via Agrobacterium cepa 3101 contendo o plasmídeo pk7WG2D-gfp-g2S2-6His-DomB, comparada a outro grupo onde houve a co-infiltração com Agrobacterium EHA101 contendo TCV-CP, que funciona como um supressor do silenciamento de genes pós-transcricionais, apresentou resultado promissor. Após o quinto dia de agroinfiltração, as folhas de S. tuberosum com 5 - 8 semanas foram desafiadas com a bactéria fitopatogênica e observadas por mais sete dias. Ao final desse período observamos que houve uma reação de hipersensibilidade no local de aplicação, mas que tal processo não se expandiu por todo o tecido foliar. O imunoensaio dot-blot sugere a expressão do polipeptídeo p2S26His-DomB nas folhas infiltradas com o plasmídeo e com o TCV-CP. Buscando obter cultivares resistentes a um problema nas culturas de batata, que é a infecção por P. atrosepticum, o projeto pode potencialmente adicionar informações sobre os mecanismos de defesa das plantas modificadas geneticamente com o gene g2S2-6His-DomB e propiciar uma melhor ação na produção de plantas transgênicas resistentes a fitopatógenos com o gene sintético DomB.