Polissacarídeos sulfatados da alga verde Ulva lactuca L.: caracterização química parcial e análise das atividades anticoagulante, antitrombótica e anti-inflamatória - Reis, Samara Evangelista (2016)
As doenças cardiovasculares, entre as quais se incluem as desordens trombóticas, estão entre as principais causas de mortalidade no mundo. A heparina é um polissacarídeo sulfatado de origem animal utilizado mundialmente como um agente terapêutico (anticoagulante e antitrombótico). Os polissacarídeos sulfatados (PS) de algas marinhas possuem estruturas complexas, o que tem tornado interessante os estudos de suas possíveis atividades biológicas. No presente trabalho, PS das algas Ulva lactuca L. (Ul) e Fucus vesiculosus L. (Fv) foram extraídos por proteólise enzimática, seguida de fracionamento com diferentes volumes de acetona. As frações obtidas foram, inicialmente, analisadas por eletroforese em gel de agarose. Os teores de proteínas, açúcares totais, ácidos urônicos e sulfato foram determinados por dosagens químicas e o peso molecular foi determinado por eletroforese em gel de agarose. A composição monossacarídica foi determinada por Fluorophore Assisted Carbohydrate Electrophoresis (FACE) e por cromatografia em papel. Além disso, foram realizadas análises espectroscópicas por FT-IR/ATR e Raman. A atividade anticoagulante foi investigada por testes in vitro TTPa, TP, TT e ensaios cromogênicos (anti-fatores Xa e IIa). A atividade antitrombótica foi avaliada in vivo pelo modelo da ligadura da veia cava inferior em ratos Wistar e in vitro, pela dosagem de NO e pela dosagem da atividade de metaloproteinases em cultura de células de aorta de coelho (RAEC). A atividade anti-inflamatória foi investigada pela dosagem de NO, citocinas (IL-6 e TNF-α) e metaloproteinases em cultura de macrófagos (RAW 264.7). As frações F50Ul, F70Ul, F50Fv e F70Fv apresentaram bandas na eletroforese em gel de agarose com metacromasia e padrão de migração característicos da presença de polissacarídeos sulfatados, levando a seleção dessas frações para análises posteriores. A análise da composição química revelou a presença de polissacarídeos ricos em sulfato e carboxila, o que foi confirmado pelas análises espectroscópicas. Os PS apresentaram elevado peso molecular, sendo que as frações de U. lactuca L. apresentaram como principal monossacarídeo a ramnose, além de glicose, galactose e ácidos urônicos, enquanto as frações de F. vesiculosus L., apresentaram fucose, glicose e ácidos urônicos. As frações F50Ul e F50Fv, F70Fv prolongaram o TTPa (0,1-1,0 μg/mL) e inibiram a atividade dos fatores Xa e IIa (1 μg/mL). Além disso, essas frações (20 μg/g), apresentaram efeito antitrombótica in vivo após 24 horas de ação. F50Ul mostrou melhor atividade nas concentrações 5-10 μg/g e apresentou um efeito tempo dependente, com inibição completa da formação de trombos decorridas 12 horas de ação (10 μg/g). Na avaliação in vitro F50Ul (25-100 μg/mL) aumentou a produção de NO pelas células endoteliais de aorta de coelho, sendo que após 12 horas de incubação esse aumento ocorreu de forma mais significativa. Em cultura de células RAW 264.7, os PS das algas foram capazes de interferir na produção de NO, interleucinas e metaloproteinases, sendo que F50Fv e F70Fv inibiram a resposta inflamatória, enquanto F50Ul estimulou o aumento destes mediadores. Os resultados obtidos sugerem atividades importantes para os PS de U. lactuca L. o que permite propor a continuação dos estudos para melhor entendimento dos mecanismos de ação envolvidos, bem como de suas estruturas.