Isolamento, caracterização e avaliação da atividade de bacteriófagos líticos para biocontrole de Pseudomonas fluorescens em leite cru - Nascimento, Edilane Cristina do (2020)
O controle do crescimento de bactérias psicrotróficas no leite cru é crucial para a manutenção da sua qualidade e de seus derivados. Pseudomonas fluorescens destaca-se como principal contaminante, com capacidade de produzir enzimas hidrolíticas termoestáveis. Bacteriófagos, vírus que infectam exclusivamente bactérias, tem sido uma alternativa promissora de biocontrole em alimentos. Contudo, sua eficácia no controle da microbiota deteriorante de leite cru ainda é pouco estudada. Os objetivos desse estudo foram isolar e caracterizar bacteriófagos líticos e avaliar seu efeito sobre a contagem bacteriana, atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. Foram utilizadas amostras de água de córregos, rio e efluente de laticínios e o método de enriquecimento para isolamento dos bacteriófagos contra P. fluorescens. Foram isolados dezoito bacteriófagos, dos quais sete foram selecionados para caracterização preliminar. A titulação desses bacteriófagos variou de 7 a 9 Log UFP/mL e o tamanho das placas de lise de 0,39 a 2,67 mm. Os isolados apresentaram capacidade de infecção restrita ao gênero Pseudomonas. Dois desses bacteriófagos (Ph6 e Ph32) foram caracterizados mais amplamente. Ph6 e Ph32 apresentaram tamanhos de genoma de 38,8 e 31,3 kbp; período de latência de 96 e 25 min; e burst size de 295 e 40 partículas virais por célula bacteriana infectada, respectivamente. Nenhum dos dois bacteriófagos foi termicamente inativado após 30 min de tratamento a 63 e 72 °C, e mantiveram suas titulações estáveis após exposição em faixas de pH de 5 – 11 por 60 min. Ambos os bacteriófagos foram inativados após tratamento com hipoclorito de sódio a 200 mg/L durante 30 min. Os bacteriófagos Ph6 e Ph32 reduziram a contagem de P. fluorescens em meio de cultivo à base de leite a 4 e 10 °C durante os 7 dias de armazenamento. Além disso, atrasaram em dois dias a atividade proteolítica e proteólise causada por P. fluorescens. No leite cru eles reduziram as contagens de Pseudomonas spp., psicrotróficos e aeróbios mesófilos em 3,2; 2,5 e 2,9 Log UFC/mL, respectivamente, após 7 dias de armazenamento a 4 °C. Os bacteriófagos do presente estudo possuem potencial para aplicação como agentes de controle biológico para preservação do leite cru refrigerado.