Desenvolvimento de método cromatográfico (HPLC-UV) para a determinação de ácidos fenólicos extraídos por ultra-som de forrageiras tropicais - Santos, Mellina Damasceno Rachid (2009)
O desempenho dos bovinos em regime de pastejo pode ser melhorado com o aumento da digestibilidade da forrageira. Os ácidos p-cumárico e ferúlico estão associados aos componentes da parede celular através de ligações éster ou éter, podendo influenciar negativamente na digestibilidade das forrageiras. O presente trabalho propõe uma metodologia de extração com ultra-som e separação por HPLC dos ácidos ferúlico, p-cumárico, m-cumárico, o-cumárico, cafeico e ácido chiquímico, e a quantificação dos ácidos ferúlico e p-cumárico éster ligados em forrageiras tropicais. A metodologia de análise foi desenvolvida em um cromatógrafo líquido de alta eficiência com detecção absorciométrica no UV e coluna de fase reversa C-18. Composição e pH da fase móvel, programação dos comprimentos de onda de detecção foram parâmetros estudados na otimização do método. No estudo da composição da fase móvel, foram testados diferentes solventes orgânicos e soluções aquosas em diferentes valores de pH, onde a melhor condição foi obtida com eluição isocrática usando como fase móvel acetonitrila/metanol/solução aquosa H3PO4 pH 2,05 (13:12,5:74,5). A fim de se diminuir o tempo do processo de tratamento das amostras, foi estudada a extração empregando o ultra-som, que se mostrou um processo mais rápido e reprodutível se comparado com a extração em banho ultratermostático. Foi feita a avaliação do método aplicando padronização externa e padronização interna. A padronização interna usando o ácido mcumárico como padrão surrogate e o ácido o-cumárico como padrão interno, produziu bons resultados, dentre eles limites de detecção de 0,09 e 0,04 mg/L para os ácidos p-cumárico e ferúlico, respectivamente, e valores de recuperação que variaram de 83 a 99 %. Sendo assim, a metodologia implementada foi aplicada a análise de 43 amostras de forrageiras, fornecidas pela Embrapa Gado de Leite, de quatro espécies: Cynodon nlemfuenses cv. Florona, Cynodon dactylon cv. Florakirk, Panicum maximum cv. Mombaça e Brachiaria brizantha cv. Marandu. Foram analisadas as frações caule e folha, cujas faixas de valores encontrados foram de 3,63 a 9,04 mg/g peso seco para o ácido p-cumárico e 3,35 a 7,69 mg/g peso seco para o ácido ferúlico.