Identificação de alvos antigênicos na ATP difosfohidrolase solúvel de Schistosoma mansoni e possível aplicação funcional de peptídeos sintéticos - Mendes, Rita Gabriela Pedrosa Ribeiro (2010)
A antigenicidade das isoformas de ATP difosfohidrolase, a solúvel e a associada à membrana, foi recentemente descrita. Imunoreatividade cruzada entre a apirase de batata e anticorpos IgG de camundongos infectados com S. mansoni ou pacientes com esquistossomose sugeriu fortemente que os epitopos compartilhados entre as proteínas do vegetal e parasito são antigênicos. Por análises de bioinformática, um estudo comparativo e estratégico dos domínios compartilhados entre a isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase e a apirase de batata permitiu a predição de um domínio homólogo e antigênico disponível para a ligação de anticorpos e moléculas HLA-DR. Peptídeos sintéticos derivados do domínio das proteínas do parasito (Sm) e da batata (pot) foram então obtidos. Usando ELISA, amostras de soro de pacientes com esquistossomose (n= 146) mostraram alta soropositividade de anticorpos das subclasses IgG1 (58%) e IgG4 (58%) para apirase de batata. Pacientes soropositivos (n= 35) foram então selecionados para a análise da reatividade de anticorpos contra os peptídeos sintéticos. Soropositividade significativa de IgG (potB1LJ, 9%; potB1MP, 54%; potB2LJ, 54%; SmB1LJ, 23%; SmB1MP, 86%; SmB2LJ, 34%), e de IgG1 (potB1LJ, 57%; potB1MP, 67%; potB2LJ, 46%; SmB1LJ, 57%; SmB1MP, 10%; SmB2LJ, 31%) ou IgG4 (potB1LJ, 71%; potB1MP, 40%; potB2LJ, 71%; SmB1LJ, 54%; SmB1MP, 63%; SmB2LJ, 49%) foi observada para os peptídeos homólogos confirmando a existência de epitopos antigênicos compartilhados entre as proteínas do parasito e vegetal, e demonstrando que na esquistossomose o domínio r155-194 da isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase é rica em epitopos para células B. A reatividade de anticorpos IgG1 e IgG4 de amostras de soros de pacientes (n= 26) curados após a quimioterapia com o praziquantel, foi analisada com potB1LJ e potB2LJ, antes e 6 meses após o tratamento. Análise individual revelou reatividade variável de IgG1 e IgG4 com cada peptídeo, sugerindo que diferentes epitopos antigênicos poderiam estar envolvidos na susceptibilidade ou resistência à reinfecção por S. mansoni. Usando ELISA, anticorpos policlonais contra apirase de batata de camundongos BALB/c ou CBA/J reagem com potB1LJ, potB1MP e/ou potB2LJ. Reatividade similar foi também observada entre estes soros imune e SmB1LJ, SmB1MP e/ou SmB2LJ, confirmando novamente a imunoreatividade cruzada entre as proteínas do parasito e vegetal. Adicionalmente, o inóculo de cada peptídeo em camundongos Swiss saudáveis teve significativa atividade imunoestimulatória, elevando a quantidade de anticorpos IgG e/ou IgG1 e IgG2, como observado por ELISA e/ou “Dot blots”, sugerindo que cada peptídeo tem dois epitopos distintos capazes de induzir resposta imune do tipo Th1 ou Th2. Por “Western blots”, o soro imune anti-SmB2LJ reconheceu 2 polipeptídeos de aproximadamente 63 e 55 kDa em SEA e SWAP, indicando a presença da isoforma solúvel de ATP difosfohidrolase nestas preparações antigênicas, bem como a sensibilidade e especificidade deste soro imune. A apirase de batata e o potB1LJ foram avaliados em reação de hipersensibilidade tardia (DTH) usando a ovalbumina (OVA) como antígeno padrão, por medidas de edema de pata, titulação de subclasses de anticorpos por ELISA, e análise histológica. Aparentemente, a reação inflamatória foi similar entre a apirase de batata e a OVA, enquanto potB1LJ inibiu a reação de DTH. Estudos futuros destas novas biomoléculas poderão contribuir para um melhor entendimento da interação parasito e hospedeiro, e poderão ser exploradas como novas ferramentas de estudo da esquistossomose.