Peptídeo derivado da lactoferricina bovina: síntese, caracterização, avaliação da atividade frente a linhagens celulares de câncer de mama e desenvolvimento preliminar de formulação lipossomal - Arbeláez, Manuela de la Rosa (2024)
A proposta deste trabalho foi sintetizar e caracterizar dois peptídeos derivados da lactoferricina bovina (26[F] LfcinB (20 – 30)2 e 26[1-NAL] LfcinB (20 – 30)2), avaliar a atividade in vitro frente a linhagens celulares de câncer de mama (MCF-7 e MDAMD-231) e posteriormente desenvolver uma formulação lipossomal para a encapsulação do peptídeo considerado mais promissor. Os peptídeos foram obtidos por síntese em fase sólida (SPPS) utilizando a metodologia 9- fluorenilmetiloxicarbonilo/terc-butila (Fmoc/tBu), purificados por cromatografia SPE e as frações coletadas foram analisadas por CLAE-FR, ESI-Q-TOF e MALDI-TOF. O grau de pureza foi maior que 80% para ambos os peptídeos. Os resultados de CLAE-FR evidenciaram que os tempos de retenção obtidos foram semelhantes aos reportados na literatura. Os espectros de massa ESI-MS apresentaram sinais de [M+H]+ muito próximos das razões m/z esperadas, o que pôde confirmar a identidade química dos peptídeos. Ademais, a identificação molecular foi confirmada por MALDI-TOF/MS. Os peptídeos foram também avaliados com relação à influência na viabilidade de células tumorais (MCF-7 e MDA-MB-231) e célula normal (CCD1059 SK) por meio do método de redução do sal de tetrazólio. Nesse caso, o peptídeo 26[F] LfcinB (20 – 30)2 apresentou maior seletividade frente às células tumorais, especialmente para a linhagem MDA-MB-231, considerada altamente invasiva e com elevado potencial metastático. Por isso, foi escolhido para a continuidade do estudo. Na avaliação do efeito anti-migratório (scracth assay) frente às linhagens tumorais, esse peptídeo mostrou efeito dose-dependente com atividade inibitória mais pronunciada, também, para a linhagem MDA-MB-231. Finalmente, lipossomas (Lip) convencionais foram desenvolvidos por meio da técnica de nanoprecipitação para a encapsulação do peptídeo (Lip-Pep), os quais foram caracterizados em relação ao diâmetro hidrodinâmico médio (DHm), índice de polidispersividade, potencial Zeta (PZ), eficiência de encapsulação (EE) e perfil de liberação in vitro. As vesículas desenvolvidas apresentaram característica monodispersa (PdI < 0,3). O DHm dos Lip-Pep (102,6 ± 9,91 nm) foi maior que o observado para os Lip “brancos” (sem a adição do peptídeo; Lip-B = 74,99 ± 1,32 nm), o que constituiu o primeiro indício da ocorrência da encapsulação. A EE do peptídeo nos lipossomas foi de aproximadamente 100%. O PZ dos Lip-Pep (-22,3 ± 3,54 mV) apresentou-se menos negativo do que o obtido para os Lip-B (-32,0 ± 1,82 mV), provavelmente devido a interações eletrostáticas entre o peptídeo catiônico e o fosfolipídeo aniônico utilizado para o preparo dos lipossomas. Essa hipótese pode explicar o resultado obtido no ensaio de liberação in vitro, o qual demonstrou não haver liberação do peptídeo durante as 24 horas do experimento. Esse comportamento inviabilizou avaliações adicionais da formulação. Assim, apesar de constatarmos uma promissora atividade do peptídeo frente à linhagem MDA-MB-231, para a continuidade do estudo será necessário desenvolver nova formulação lipossomal, possivelmente com fosfolipídeo não-inônico.