Avaliação da resposta imune a antígenos de fase ativa, de fase latente (DOSR) e de fase de reativação (RPF) de Mycobacterium tuberculosis em pacientes com tuberculose e contatos com diagnóstico de infecção latente - Mattos, Ana Márcia Menezes de (2016)
A tuberculose (TB) permanece como um dos maiores problemas de saúde pública no mundo. A identificação de novos antígenos de Mycobacterium tuberculosis e de biomarcadores de infecção, capazes de auxiliar no diagnóstico da doença ativa e da infecção latente são metas importantes para o controle da TB. No presente trabalho foram estudados pacientes TB antes e após receberem o tratamento, e indivíduos contatos TB com diagnóstico de infecção latente (PPD+). Foram investigados os níveis séricos de IgG e IgG1 e a produção de citocinas e quimiocinas contra os seguintes antígenos: 1) antígenos da fase de infecção ativa (ESAT-6/CFP-10, Rv0717 e Rv3353); 2) infecção latente ou DosR (Rv1733, Rv2628, Rv2029 e Rv1737); e, 3) antígenos da fase de reativação da infecção ou Rpf (Rv0867 e Rv2389). A produção de IFN-ꝩ, TNF-α,IL-17, IL-10 e IL-4 foi avaliada em culturas de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) estimuladas com antígenos do M. tuberculosis, através de ELISA e/ou CBA-citometria. Níveis séricos de CCL-2, CXCL-8, CXCL-9 e CXCL10 foram mensurados em pacientes TB e controles. Nossos resultados mostram níveis séricos elevados de anticorpos IgG1 contra ESAT-6/CFP-10, Rv0717, Rv3353, Rv1733, Rv2029, Rv2628 e Rv0867 em pacientes com TB ativa em comparação ao grupo controle (p<0.001). Após completada a quimioterapia, a resposta de IgG1 frente aos antígenos ESAT-6/CFP-10, Rv3353, Rv2628, Rv2029, e Rv0867 foi reduzida a níveis de controle (p<0,01). A análise da curva ROC confirmou o bom desempenho dos antígenos Rv0717, Rv1733, Rv3353, Rv2628, Rv2029 e Rv0867 no diagnóstico da TB. Interessantemente, Rv0717 e Rv1733 induziram um pico de resposta de IgG1 após 1-3 meses de quimioterapia (p<0,01). Neste grupo de pacientes (1-3M), uma alta produção de IFN-ꝩ e TNF-α foi observada após estimulação de PBMC com ESAT6/CFP-10, Rv1733 e Rv2029. Os grupos não diferiram na produção de IL-17, IL-10 e IL-4, indicando uma predominante resposta com perfil Th1 nos pacientes estudados. Níveis elevados de CXCL-8, CXCL-9 e CXCL-10 foram detectados no soro de pacientes com TB ativa. Após 6 meses de tratamento os níveis séricos de CXCL-9 e CXCL-10 foram reduzidos a níveis de controle. Níveis séricos elevados de anticorpos IgG e IgG1 específicos para os antígenos ESAT-6/CFP-10 e Rv1733 foram observados em pacientes com TB ativa e em contatos TB, em comparação com o grupo controle (p< 0,05). De forma semelhante, pacientes TB e contatos TB também não diferiram quanto a produção de IFN-ꝩ em resposta ao antígeno ESAT-6/CFP-10, indicando haver dificuldade em diferenciar pacientes com TB ativa de indivíduos com TB latente. Interessantemente, em resposta ao antígeno DosR Rv1733, níveis elevados de IFN-ꝩ foram observados nas culturas de PBMC dos contatos TB, em comparação aos grupos TB ativa e controle sadio (p<0,05). Em conjunto, esses resultados sugerem a existência de biomarcadores da tuberculose, representados por: 1) detecção de níveis elevados de anticorpos IgG1 contra ESAT-6/CFP-10, Rv0717, Rv3353, Rv1733, Rv2628, Rv2029 e Rv0867; 2) alta produção de IFN-ꝩ e TNF-α em resposta a diferentes antígenos do M. tuberculosis; e, 3) níveis séricos aumentados de CXCL-9 e CXCL-10. Esse perfil de resposta imune pode auxiliar no diagnóstico da TB e no monitoramento do tratamento. Além disso, a detecção de níveis elevados de IFN-ꝩ em resposta ao antígeno Rv1733 pode contribuir no diagnóstico da doença em contatos TB que apresentam tuberculose assintomática.