Glicosaminoglicano do camarão Farfantepeneaus brasiliensis: caracterização físicoquímica e atividades anticoagulante e antitrombótica - Coelho, Tayná Rodrigues (2022)
Glicosaminoglicanos de animais marinhos são compostos com grande potencial terapêutico devido a sua variabilidade estrutural. O objetivo deste estudo foi realizar a extração, caracterização química, e investigar as atividades anticoagulante e antitrombótica do heparam sulfato (HS) obtido do camarão Farfantepeneaus brasiliensis. A fração F2M foi obtida por cromatografia em resina de troca iônica em step-wise, analisada por eletroforese em gel de agarose em dois sistemas de tampões (PDA e Ba/PDA), seu conteúdo químico foi determinado por dosagens químicas (conteúdo de hexosamina, ácido urônico, sulfato e proteína residual). O peso molecular modal foi estimado por eletroforese e gel de poliacrilamida. As características estruturais do HS foram obtidas por despolimerização enzimática utilizando liases oriundas da Flavobacterium heparinum (heparinase e heparitinases) e por meio de técnicas espectroscópicas RAMAN e FT-IR. A atividade anticoagulante foi investigada in vitro pelo método USP 1965, TTPa, Tempo de Fibrinogênio e inibição dos fatores Xa e IIa. Em RAEC, foi avaliado a capacidade do HS em estimular a síntese do proteoglicano de heparam sulfato (PGHS) antitrombótico, utilizando marcação metabólica com sulfato [S35]. A atividade antitrombótica foi avaliada in vivo (CEUA/UFJF 014/2019) pelo modelo de trombose induzida pela ligadura da veia cava inferior, em ratos machos Wistar e, foi avaliada o TTPa no sangue dos ratos expostos a fração F2M. A Atividade hemorrágica in vivo da fração F2M do camarão F.brasiliensis foi realizada utilizando ratos machos Wistar, pelo modelo de escarificação caudal. Os resultados demonstraram que a fração F2M apresentou bandas de migração eletroforética com metacromasia similar ao HS, alta concentração de sulfatos, peso molecular de 56,86 kDa, e é composta pelos dissacarídeos U-GlcNS, 6S e U-GlNS, comummente encontrados em HS de animais terrestres. A fração F2M na concentração de 55 μg/μl, prolongou o TTPa em 8 vezes em relação ao controle negativo, inibiu significativamente os fatores Xa e IIa, 60% e 90%, respectivamente. RAEC estimuladas com fração F2M (13,7 e 27,5 μ/mL) apresentaram aumento de síntese de PGHS de maneira dose-dependente. Na análise da atividade antitrombótica in vivo, a fração F2M (27,5 μ/mL) reduziu em 80% o trombo formado após 1 hora de exposição, no entanto não foi observado prolongamento do TTPa quando avaliado no sangue desses animais. Além disso, a fração F2M não apresentou sangramento residual significativo quando comparado a heparina. Os resultados mostraram que o HS obtido do cefalotórax do camarão Farfantepeneaus brasiliensis apresenta atividade antitrombótica e anticoagulante promissoras e sugerem que a atividade antitrombótica pode não estar correlacionada somente com a inibição dos fatores envolvidos na via intrínseca da coagulação sanguínea.