Estudo comparativo de protocolos e meios de cultivo para isolamento de Leptospira sp. - Diniz, Rafaela Lopes (2011)
A leptospirose é uma doença bacteriana de caráter zoonótico, que possui uma ampla distribuição geográfica onde pode acometer animais domésticos, silvestres e o homem. A soroaglutinação microscópica(SAM) é o método recomendado pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para o diagnóstico da enfermidade. Apesar disso, para um maior avanço nos estudos epidemiológico e em vacinologia deve-se recorrer ao isolamento do agente. O presente estudo busca fazer uma avaliação comparativa entre os diferentes protocolos e meios de cultivos descritos, na busca de um aprimoramento da metodologia. Nove amostras de urina humana, recém emitidas, foram contaminadas experimentalmente com Leptospira interrogans serovares Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Hardjo nas concentrações de 10 elevado a dois, 10 elevado a cinco, 10 elevado a oito leptospiras por mL. Tais amostras foram submetidas a três protocolos de seleção com diluição seriada, coquetel de antibióticos e filtração (0,22μm). Em seguida foram inoculados em quatro meios de cultura : EMJH,EMJH acrescido de 5-Fluoruracil, Fletcher e EMJH Tween 40/80/LH. Os cultivos foram analisados semanalmente por até quatro meses. O protocolo de diluição seriada teve 22/36 (61,1%) de amostras isoladas; já o protocolo de seleção por meio de coquetel com antibiótico obteve 10/36 (27,7%) isolados, e o protocolo de filtração obteve 1/36 (2,7%) isolado. O protocolo de diluição seriada obteve diferenças significativas quando correlacionado ao protocolo de seleção por meio de coquetel de antibiótico (p=0.0086) e ao protocolo de seleção por filtração (p.0.0001). Os protocolos de seleção por coquetel de antibiótico e protocolo de seleção por filtração obtiveram diferenças significativas (p.0.0065). Não houve diferenças significativas entre os meios nos três protocolos testados. Independentemente do meio de cultivo a ser utilizado no isolamento de leptospiras, deve-se priorizar o tipo de protocolo a ser empregado. No presente estudo o protocolo de diluição seriada obteve resultados significativos, sendo recomendado para ampliar as chances de sucesso no isolamento do agente.