Avaliação funcional da neurotransmissão colinérgica no epidídimo, ducto eferente e ducto deferente de rato e seu envolvimento com a secreção de clusterina - Moreira, Tatiana Jales (2019)
Estudos anteriores do nosso laboratório demonstraram a expressão dos subtipos de receptores muscarínicos M1, M2 e M3 de acetilcolina nos ductos eferentes e no epidídimo de ratos, mas suas funções não foram totalmente esclarecidas. Considerando que a clusterina (CLU) é uma proteína abundante no epidídimo e importante para o processo de maturação dos espermatozoides, juntamente com o envolvimento da inervação autonômica na secreção de proteínas no epidídimo, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de agonistas e antagonistas colinérgicos sobre a secreção da CLU em epidídimo, ductos eferentes e ducto deferente de rato. Para isso, ratos Wistar machos adultos (CEUA-UFF 931/17) foram randomizados em 6 grupos (n=6/grupo) e receberam 250μl (i.v.) contendo solução salina (CO); 0,04 mg.k-1 de carbacol (CA) na ausência ou presença de antagonistas: 1,8 mg.k-1 de atropina (AT), 0,5 mg.k-1 de pirenzepina (PI), 0,5 mg.k-1 de metoctramina (ME) ou 0,2 mg.k-1 de darifenacina (DA). Os animais foram mantidos sob anestesia e 2 horas após os tratamentos, os epidídimos foram retirados e dissecados. Homogenatos foram preparados para ensaios de western blot ou os tecidos, incluindo ductos eferentes e ducto deferente, foram incluídos em parafina para imuno-histoquímica. A avaliação espermática (motilidade progressiva, vigor, integridade da membrana e teste hipo-osmótico) foi realizada utilizando-se espermatozoides obtidos da cauda do epidídimo. Valores são média±EPM (ANOVA one-way, Newman-Keuls; P<0,05). Os resultados mostraram que não houve diferença estatística na expressão de CLU na cabeça do epidídimo entre os diferentes grupos experimentais, quando comparados ao controle. Na cauda proximal do epidídimo, o tratamento com a AT+CA, ME+CA e a PI+CA induziram um aumento na marcação de CLU na região apical e de estereocílios, com uma marcação mais intensa com a PI. O DA+CA não alterou a marcação da CLU nessa região. Tais resultados estão de acordo com resultados da análise de western blot, em que o tratamento com PI+CA aumentou consideravelmente a expressão proteica da CLU, mais do que a AT e a ME. No ducto deferente também se observou um aumento da expressão desta proteína com os mesmos tratamentos e nos ductos eferentes, a pirenzepina, particularmente, diminuiu a expressa da CLU. Quanto à avaliação da funcionalidade dos espermatozoides, nemhum parâmetro analisado foi alterado nos diferentes grupos. Em resumo, nossos dados sugerem que o bloqueio dos receptores muscarínicos do subtipo M1 e M2, mas não de M3, altera a expressão de CLU de forma variável, dependendo do tecido e segmento analisado, sugerindo o envolvimento desses receptores na modulação de processos secretórios e/ou regulatórios da expressão proteica e composição do fluido luminal, importantes para a maturação do gameta masculino