Investigação epidemiológica, análise histopatológica, análise imunohistoquímica e genotipagem de Toxoplasma gondii em ovinos - Consalter, Angélica (2019)
O ovino é importante para geração de renda e sustento social. A toxoplasmose é a principal doença reprodutiva nesta espécie. Além disso, os ovinos são importantes no ciclo zoonótico da doença. O objetivo principal deste estudo foi determinar o comportamento da toxoplasmose em ovinos de uma área endêmica para toxoplasmose humana no noroeste do Rio Grande do Sul (RS) por meio da soroepidemiologia, histopatologia, imuno-histoquímica e genotipagem. O controle sanitário é essencial para melhorar a eficiência produtiva nos rebanhos ovinos. No Capítulo 1 desta tese foi realizada a caracterização soroepidemiológica de patógenos reprodutivos. Foram coletadas amostras de sangue de 319 ovinos provenientes de 14 propriedades rurais de 10 municipios do noroeste do RS. A prevalência de Toxoplasma gondii foi de 70,2% (224/319) no MAT, Neospora caninum 20,3% (61/300) na RIF e Leptospira spp. 5,6% (18/319) no MAT em rebanhos comerciais de ovinos localizados na mesorregião noroeste do Rio Grande do Sul. No Capítulo 2 foi realizada a identificação de Toxoplasma gondii em ovinos abatidos para o consumo humano em abatedouros da mesma região. Anticorpos anti-T. gondii foram observados em 22,1 % (32/145) no MAT das amostras de soro de ovinos. A histopatologia e imuno-histoquímica foram analisadas a partir dos tecidos (cérebro, coração e diafragma) dos ovinos soropositivos. As principais lesões observadas foram caracterizadas como microgliose cerebral associada à malácia, nódulo glial e encefalite necrotizante perivascular. Foram identificadas 50% (16/32) das amostras contendo cistos de T. gondii em pelo menos um tecido de cada animal. A imunoreatividade foi observada na meninge (1/16), diafragma (11/16), coração (14/16) e ao redor de vasos sanguíneos e um animal foi positivo na PCR. No Capítulo 3 foi realizado a caracterização genética de um isolado de T. gondii. Foram coletadas amostras de soro e tecidos de 38 ovinos provenientes de abatedouro do município Marau, RS. Após triagem sorológica três foram positivos (título MAT 1:25). De forma complementar, amostras de tecidos de um ovino oriundo de uma fazenda da mesma região e com título 1:800 também foram analisadas. Os tecidos dos quatro ovinos foram submetidos à prova biológica em camundongos. Um isolado foi obtido do tecido do músculo da coxa do ovino de título 1:800. Após o isolamento do parasito, o macerado do tecido de cérebro de camundongos, que foram observados cistos, foi inoculado em células VERO (células de rim de macaco verde africano). O isolado foi propagado na cultura de células com a observação do ciclo lítico 29 dias após a infecção. O DNA foi extraído do macerado do tecido cerebral e do lavado peritoneal dos camundongos e das amostras de cultura. Após a extração de DNA e PCR convencional, o DNA dos isolados foi amplificado em nested-PCR (nPCR) para 11 marcadores moleculares: SAG1, SAG2 (5’+3’SAG2), SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, alt. SAG2 e Apico. Este isolado foi denominado TgOvBrRs6, o qual apresentou genótipo não arquetípico, que não havia sido descrito anteriormente no Brasil. Assim, foi confirmada a diversidade genética deste parasito na região estudada. No Capítulo 4 desta tese foram desenvolvidos protocolos informativos com orientações de prevenção da toxoplasmose em ovinos como uma ação de extensão para a comunidade. A realização desta tese foi ampla e relevante pois abordou a epidemiologia, parasitologia e patologia da toxoplasmose em ovinos em uma região endêmica para toxoplasmose humana e animal.