Avaliação da quantificação e genotipagem do DNA de biopsia de embriões bovinos produzidos In vitro - Martins, Júlia Medeiros Cruz de Lima (2023)
A produção in vitro de embriões (PIVE) e a seleção genômica representam tendências em programas de melhoramento genético bovino. A genotipagem do embrião biopsiado possibilita obter informações genômicas que o selecio nam antes mesmo da transferência. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar amostras de biopsia de embriões bovinos, sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência embrionária pós-transferência (embriões com prenhez positiva ou negativa) afetariam a quantidade e qualidade da amostra de DNA obtida. Para tanto, foram utilizadas amostras congeladas de biopsia embrionária de bovinos Gir e Girolando F1 produzidos in vitro. Os embriões foram cultivados para aná lise da reexpansão e somente amostras de embriões reexpandidos e transferi dos para receptoras, foram consideradas nesse estudo (n=47). O material foi submetido à extração e amplificação de DNA utilizando o kit Illustra Single Cell Genomiphi™ DNA Amplification (GE Healthcare, Buckinghamshire, United Kingdom). A quantidade de DNA do material amplificado foi analisada pelo ele troesferograma gerado pelo equipamento 2100-“Bioanalyzer” (Agilent Techno logies, Santa Clara, CA, USA) e as amostras foram encaminhadas para genoti pagem utilizando o ensaio Bovine SNP50k (Illumina Inc., San Diego, CA, USA), realizando avaliação qualitativa dos resultados, através da call rate (CR). Obti vemos, após a amplificação, concentração média de DNA de 86,07±171,66, com alta variação entre as amostras. A CR média de 0,73±0,17 não variou em função da quantidade de DNA nas amostras (CR>80%: 67,6 ng, CR<80%: 101ng). As variáveis raça, estádio embrionário e prenhez não influenciaram nos resultados da concentração de DNA e da CR. Porém, houve efeito da prenhez negativa sobre os resultados da CR (p=0,0187). Concluímos que não há inter ferência da raça e estádio embrionário na qualidade da amostra submetida à genotipagem, e que embriões com maiores chances de implantação não refle te