Caracterização do Complexo Gama-Secretase de Blastocrithidia triatomae visando novas estratégias de controle biológico de insetos vetores da Doença de Chagas - Silva, Laís Gomes Miranda da (2023)
O protozoário Blastocrithidia, pertence à família Tripanosomatidae, compreende flagelados, monoxênicos com formas epimastigota e micromastigotas, esse gênero aparece parasitando diversos insetos como triatomíneos e culicídeos. Compreende a espécie Blastocrithidia triatomae, que é um parasito flagelado, patogênico de insetos triatomíneos, que são os vetores do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas. O complexo gama-secretase, é um complexo multimérico transmembranar, identificado em várias espécies de animais e plantas e composto por 4 sub unidades protéicas que são: presenilina (PS), nicastrina (NIC), Aph-1 e Pen-2 , é expresso em quase todos os tecidos dos mamíferos. Em humanos é mais encontrado no cérebro e neurônios, sendo alvo de estudos de doenças degenerativas Alzheimer e o Mal de Parkinson. Está envolvido na transdução de sinal, mas é pouco estudado em protozoários parasitos. Sendo assim, a caracterização deste complexo se faz necessária, assim como, a de sua porção enzimática (presenilina), para entender sua função na interação parasito-vetor, como B. triatomae-triatomíneo. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi identificar a expressão do complexo gama-secretase de B. triatomae, por ensaios de inibição, espectrofotometria, citometria de fluxo e géis de eletroforese. Pela primeira vez na literatura, foi analisada e avaliada a expressão das proteases de gama-secretase de B. triatomae. Para estimar os efeitos da inibição de gama-secretase foram utilizados os métodos colorimétricos de Resazurina e MTT. Os resultados, após a leitura por espectrofotometria, sugeriram que os efeitos da inibição de gama-secretase, podem induzir alterações na vitalidade e no estágio dos parasitos. Amostras de B. triatomae, incubadas com o inibidor de gama-secretase foram analisadas por citometria de fluxo e demonstraram uma região de diferenciação celular, provavelmente provocada pelos efeitos da inibição de gama-secretase. As amostras foram purificadas parcialmente, por cromatografia de afinidade e aplicadas em um gel de eletroforese, o zimograma da fração solúvel e insolúvel, do cultivo axênico de B. triatomae indicou a presença de duas bandas na Fração Solúvel, entre 80 a 100 kDa em acordo com as bandas entre 70 e 100 kDa do gel SDS, com os extratos brutos solúvel e insolúvel. Os resultados indicaram que uma vez que B. triatomae apresenta um complexo gama-secretase com peso molecular diferente de T. cruzi, pode ser apontado como um marcador biológico descrito pela primeira vez.