Envolvimento dos receptores P2Y na proliferação de progenitores retinianos de ratos in vivo - Pereira, Luana de Almeida (2025)
A retina é um tecido pertencente ao Sistema Nervoso Central, no qual sua histogênese é completada durante os primeiros dias pós-natal. Entre os fatores responsáveis por modular o desenvolvimento da retina estão os nucleotídeos de adenina. Alguns trabalhos na literatura descreveram sinalização purinérgica na proliferação de progenitores retinianos in vitro. Com base nessas informações, o objetivo desse trabalho foi avaliar o envolvimento dos receptores P2Y1,12 e 13 na proliferação de progenitores retinianos de ratos com dois dias pós-natal (P2). Em ratos P2, foi observado que eliminação de nucleotídeos endógenos, através da injeção intravítrea de apirase, gerava uma redução no número de células BrdU positivas (células em fase S), contudo esse efeito era revertido na presença de ADPβ-S e de ATPγ-S. Interessantemente, durante os primeiros cinco dias pós-natal foi observado um aumento da hidrolise de ATP e ADP na retina de ratos, sugerindo que a disponibilidade dessas moléculas no meio extracelular se tornava reduzida com o desenvolvimento. Corroborando com este dado, foi observado um aumento na expressão de E-NTPDases, em particular a expressão da E-NTPDase 1 e 2 durante esse período. O receptor P2Y1 foi detectado na retina de ratos ao longo do primeiro mês pós-natal. A injeção intravítrea do antagonista seletivo para o P2Y1, o MRS 2179, induziu a uma redução no número de células Ki-67 positivas após 20 horas de tratamento. Com a análise da expressão de proteínas do ciclo celular, foi possível identificar um aumento na expressão da p57Kip2 e uma redução na fosforilação do resíduo serina 780 da proteína RB, seguido por uma redução na expressão da ciclina E e no número de células em fase S. Interessantemente não houve alteração na transição da fase S para G2 e na mitose. Contudo, após 48 e 72 horas, o número de células proliferantes era semelhante ao controle e não foi detectada morte celular nas retinas tratadas com o antagonista MRS 2179, sugerindo que o bloqueio do receptor P2Y1 causou uma parada na fase G1. O receptor P2Y12 foi detectado durante os primeiros cinco dias pós-natal, e diferentemente do P2Y1, a injeção intravítrea do antagonista para o receptor P2Y12, o PSB 0709, causou um aumento no número de células Ki-67 positivas após 24 horas de tratamento. Analisando as proteínas da fase G1, houve um aumento na expressão de ciclina D1 e uma redução na expressão da p57Kip2. O aumento na expressão de ciclina D1 foi acompanhado pelo aumento no número de células ciclina D1 positivas, porém não houve alteração no número de células em fase S ou de células em mitose. Apesar do aumento na proliferação após 24 horas a injeção de PSB 0709, o número de células Ki-67 depois de 48 horas era similar as retinas controle. Interessantemente, observamos que o tratamento com PSB 0709 causou um aumento no número de células TUNEL/ciclina D1 positivas. Diferentemente dos receptores P2Y1 e P2Y12, a expressão do receptor P2Y13 foi ínfima durante a primeira semana pós-natal, e a injeção intravítrea do antagonista, o MRS 2211, não alterou a proliferação dos progenitores. Em conclusão sugerimos que os receptores P2Y1 e P2Y12 atuem durante a fase G1, sendo o P2Y1 responsável pela manutenção dos progenitores no ciclo celular, enquanto que o P2Y12 seria o responsável por estimular a saída do ciclo celular e formação de células pós-mitóticas.