Análise da imunomodulação da ouabaína nos níveis de IL-6 em culturas de células da retina: “crosstalk” de citocinas e vias de sinalização - Azevedo, Mariana de Almeida (2025)
A ouabaína (OUA) é um digitálico ligante seletivo da subunidade α da enzima sódio/potássio ATPase (NKA). Concentrações mM de OUA bloqueiam a NKA enquanto concentrações de nM tem a capacidade de ativar ativam uma cascata de sinalização intracelular. Nosso grupo demonstrou que o tratamento de culturas de células da retina com OUA (3nM) aumenta a sobrevida das células ganglionares (CGR), o que pode ter relação com dados que demonstram o efeito imunomodularor da OUA através da produção de TNFα, IL-1β e IL-6 e da ativação de astrócitos e micróglia, podendo relacionar também com trabalhos prévios de nosso grupo que mostraram o efeito trófico da IL-6 nas CGR. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito OUA: nos níveis de IL-6 e de seu receptor; nos níveis do RNAm e na liberação desta interleucina nas culturas de células da retina, em diferentes períodos. Observamos que o tratamento com OUA promoveu um aumento nos níveis de IL-6 nos tempos de 5, 15 e 45 min e reduziu 24h e 48h. Os níveis do IL-6R reduzem em 5min, 24h e 48h, mais aumentam em 15 e 45 min após tratamento com OUA. Em 15min, a neutralização do TNF-α nas culturas tratadas com OUA aumenta os níveis de IL-6 e a neutralização da IL-1β e da IL-10 bloqueia o aumento induzido pela OUA. Demonstramos que tanto o tratamento com IL-1β (2,5ng/mL) como com TNF-α (0,25ng/mL) modulam os níveis de IL-6. A IL-1β aumenta os níveis de IL-6 em 15, 45min e 48h e diminui em 24h enquanto o TNF-α aumenta esses níveis em 15, 45min e 24h e diminui em 48h. Esses dados corroboram com os dados sobre a liberação de IL-6 pelo tratamento com IL-1β, que se encontram aumentados em 45min e 24h. Enquanto o tratamento com TNF-α aumenta a liberação apenas em 48h. Em 5 min, a OUA, a IL-1β e o TNF-α diminuem a liberação de IL-6. Ao investigarmos as vias de sinalização envolvidas com esse efeito, observamos o que tanto da PKCδ como da JAK1 medeiam o efeito da OUA sobre os níveis de IL-6. Assim, nossos dados sugerem que o efeito protetor da OUA sobre as CGR seja mediado pela regulação de citocinas pró e anti-inflamatórias em culturas mistas de células da retina.