Detecção do Mycobacterium leprae em coleções de água ambientais - Macedo, Maria Luisa Bezerra de (2013)
A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo bacilo Mycobacterium leprae. No Ceará é observado o aumento do número de casos novos de hanseníase. A infecção de indivíduos suscetíveis acontece principalmente pela inalação de bacilos eliminados pelas vias aéreas superiores de pacientes multibacilares. A transmissão é influenciada por fatores genéticos do hospedeiro, estado nutricional e taxa de exposição ao M. leprae ou outras micobactérias. Acredita-se que o contato com fatores ambientais sejam possíveis fontes de infecção, como a água, o solo e alguns animais. O papel exato do ambiente na dinâmica de transmissão ainda é especulativo. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar por técnicas de biologia molecular a presença de ácidos nucleicos de M. leprae em amostras de águas ambientais coletadas em áreas endêmicas de municípios de Estado do Ceará, assim como cultivar micobactérias ambientais nestas mesmas amostras. Foram coletadas amostras de água de 24 reservatórios, sendo coletadas réplicas de cada sítio selecionado, totalizando 119 amostras. As amostras coletadas foram provenientes de açudes, riachos, rios e balneários recreativos. O DNA e RNA total foram extraídos através de kits específicos para amostras ambientais de acordo com as recomendações do fabricante, seguido de amplificação dos ácidos nucleicos por PCR e RT-PCR respectivamente, gerando produto de 187pb relativo ao gene gyrA de M. leprae. Em relação ao cultivo, as amostras de água foram descontaminadas e cultivadas em meio Lowestein-Jensen, seguido de identificação da espécie de micobactéria por método de PRA. O DNA e o RNAm do M. leprae foram detectados em todos os municípios estudados. Do total de 119 amostras de água analisadas, 76 apresentaram positividade para ácidos nucleicos de M. leprae (64%). Dentre estas, 23 foram positivas apenas para DNA (30,3%), 24 apenas para RNAm (31,5%) e 29 positivas para ambos os ácidos nucleicos (38,2%). O produto de PCR de duas amostras da região gyrA foi confirmado por sequenciamento e BLAST. Houve uma significância estatística de maior frequência de positividade de DNA e RNAm nos reservatórios de água com temperatua média de 28,4oC. O cultivo mostrou que além do bacilo M. leprae, as amostras de água continham espécies de micobactérias não tuberculosas Este estudo indica presença de DNA e RNAm de M. leprae nas amostras de águas ambientais. Demonstrando, portanto, não somente a existência do bacilo da hanseníase, mas indica fundamentalmente a presença de bacilos viáveis, os quais são geneticamente iguais à referência de M. leprae em relação ao fragmento analisado. Desta forma, os resultados obtidos contribuem para ampliar o conhecimento da dinâmica de transmissão da hanseníase.