Efeito da morfocinética na resposta ao estresse em embriões bovinos produzidos in vitro - Silva, Thaís da (2014)
A cinética do desenvolvimento embrionário pode estar relacionada com a viabilidade dos embriões produzidos in vitro (PIV) no que diz respeito ao estresse celular. Embora ainda permaneça a hipótese de que embriões que apresentam cinética de desenvolvimento mais rápida podem apresentar maior viabilidade, embriões que se desenvolvem mais rápido nas suas primeiras clivagens também podem apresentar maior resposta ao estresse. Com base nesses dados nossos objetivos foram caracterizar o perfil de morte celular por apoptose em embriões bovinos PIV com diferentes cinéticas de desenvolvimento, além de verificar possíveis marcadores de resposta ao estresse nestes embriões. Para tal, os complexos cumulus-oócitos obtidos de ovários de vacas de abatedouro comercial foram selecionados, maturados (MIV) e fecundados in vitro (FIV). Os zigotos denudados foram cultivados in vitro (CIV) individualmente e, 40 horas pós inseminação (hpi) os embriões foram classificados de acordo com suas primeiras clivagens em: rápidos (4 células) e lentos (2 ou 3 células), gerando dois grupos que foram avaliados nos seguintes estádios: clivagem (40hpi), mórula (96hpi) e blastocisto (186hpi). As avaliações consistiram de índice de embriões clivados (D2) e blastocistos (D7), número total de células, fragmentação de DNA (teste TUNEL), presença de caspase 3 e 7 ativas, presença de caspase total ativa e avaliação molecular dos genes candidatos (HSP60, GRP78, SOD1 e MORF4L2). Os dados foram submetidos ao teste t-student ou ANOVA seguida de teste Tukey quando apropriado (Prism 5 GraphPad Inc.). Não houve diferença entre os índices de clivagem dos grupos rápido e lento, no entanto maior quantidade de embriões rápidos chegaram ao estádio de blastocisto quando comparado com o grupo lento. Não houve diferença no número total de células e células TUNEL positivas entre grupos em nenhum dos momentos analisados. Apesar disso, quando o embrião está no estádio de mórula, no qual ocorre a ativação do genoma, classificada como uma fase crítica, as quantidades de caspase 3 e 7 e caspase total ativas foram maiores no grupo lento quando comparado com grupo rápido. Pela análise de expressão dos genes candidatos GRP78, HSP60, SOD1 e MORF4L2, foi possível evidenciar que os mecanismos de resposta ao ambiente PIV são diferentes entre os grupos analisados. Esse trabalho nos permite concluir que quando submetidos a PIV, embriões de diferentes cinéticas ativam vias distintas de resposta ao estresse, que podem ou não levar a morte celular por apoptose. Mais ainda, a fase de ativação do genoma embrionário é a fase mais crítica para ambos os grupos.