Estudo comparativo de ensaios de citotoxicidade aplicados à biomateriais : metodologias e condições de ensaio - Masson, Anand Oliveira (2016)
A realização de ensaios de citotoxicidade in vitro e essencial na caracterizacao inicial da biocompatibilidade de biomateriais que visam aplicacao clinica. Pela exposicao de uma cultura celular ao contato direto, indireto ou ao extrato de determinado material de interesse e possivel caracterizar a presenca e severidade de efeito citotoxico resultante. Porem, a sensibilidade dos diferentes ensaios e variavel e influenciada por inumeros fatores, relacionados as proprias condicoes de ensaio utilizadas e parametros celulares avaliados, bem como a natureza do biomaterial em analise. Assim, o estudo comparativo desses ensaios in vitro e de suas variacoes metodologicas contribui para o melhor entendimento dos protocolos empregados atualmente, e de maior relevancia devido as questoes eticas relativas ao uso de animais em ensaios biologicos. Esse estudo buscou, portanto, analisar comparativamente a influencia de diferentes condicoes de ensaio na sensibilidade dos testes de citotoxicidade - contato direto, indireto (difusao em agar) e por extrato - segundo norma ISO 10993:5 (2009), alem de avaliar a correlacao entre os resultados desses ensaios e dos parametros de citotoxicidade utilizados. Para tal, utilizou-se linhagem celular Vero e materiais conhecidamente nao citotoxicos (papel filtro) e citotoxicos (latex) como referenciais. Os parametros celulares de morfologia, proliferacao e viabilidade foram avaliados, qualitativa e/ou quantitativamente, apos 24 h, 48 h, 72 h e 120 h de ensaio. Todos os ensaios foram eficazes na avaliacao de citotoxicidade, quando analisados os parametros celulares resultantes da interacao. Porem, para a referencia citotoxica, o efeito sobre as celulas foi distinto entre os ensaios apos 24 h de exposicao, sendo mais pronunciado no ensaio por extrato. Alem disso, o ensaio de contato direto apresentou maior variabilidade quanto a viabilidade e proliferacao celular. Verificou-se ainda, que para maiores tempos de exposicao ha reducao na viabilidade celular, inclusive para amostras nao citotoxicas, independente do ensaio. A avaliacao de citotoxicidade de representantes das tres principais classes de biomateriais - ¿À-TCP (ceramica), aco AISI 316L (metal), e gelatina reticulada (polimero), segundo mesmos ensaios, porem restritos aos tempos de 24 h e 48 h, evidenciaram a nao citotoxicidade dos dois primeiros. Porem, o ensaio por contato direto nao foi o mais adequado na avaliacao do biomaterial ceramico, devido a movimentacao da amostra, dando preferencia nesse caso aos demais ensaios. Ja para a amostra metalica, apesar da influencia de seu peso no contato direto os resultados foram representativos da ausencia de citotoxicidade. Assim, podendo ser avaliado por qualquer dos ensaios. O ensaio por extrato foi o de maior sensibilidade na deteccao do potencial citotoxico da gelatina, esse podendo ser indicado como metodo de escolha no estudo de polimeros reticulados. Como a sensibilidade entre os ensaios pode variar para um mesmo tempo de exposicao e ser influenciada pelo tipo de material em analise, principalmente quando este apresenta algum potencial citotoxico, e necessario cautela na escolha do tipo de ensaio utilizado para avaliacoes de citotoxicidade. Dessa maneira, a integracao entre resultados provenientes da avaliacao de diferentes condicoes de ensaio e parametros celulares, qualitativos e quantitativos, bem como relacionados ao comprometimento fisico/morfologico e funcional, permite maior confiabilidade na caracterizacao previa da presenca e severidade de citotoxicidade in vitro de biomateriais.