Produção de citocinas e expressão de mRNA por células m ononucleares de sangue periférico sob estímulo de rHmuY de Porphyromonas gingivalis na periodontite crônica - Carvalho Filho, Paulo Cirino de (2015)
A periodontite é uma doença multifatorial, com participação significativa do hospedeiro, fatores ambientais e bacterianos. Sua fase inicial é resultante de uma microbiota multiespécie sinérgica e disbiótica, onde patógenos conhecidos como patógenos-chave possuem efeitos em toda comunidade e são componentes críticos no desenvolvimento do processo disbiótico. Nesta categoria encontra-se Porphyromonas gingivalis, um bacilo gram-negativo anaeróbico, associado as formas crônicas generalizadas da doença. A resposta do hospedeiro durante a periodontite é complexa, com elementos da imunidade inata e adaptativa que levam à inflamação crônica e destruição progressiva dos tecidos periodontais de suporte. O presente estudo objetivou avaliar a produção de citocinas e o perfil de expressão gênica em cultura de Células Mononucleares de Sangue Periférico (CMSP) de indivíduos com periodontite crônica, frente à proteína recombinante HmuY (rHmuY) de Porphyromonas gingivalis. As células de 46 voluntários, 26 sem periodontite (SP) e 20 com periodontite crônica (PC), foram cultivadas in vitro na ausência de estimulação antigênica e sob estímulos de Pokeweed e de rHmuY por 48 horas. Após o cultivo celular, foi realizado o ensaio imunoenzimático ELISA para avaliar a produção das citocinas IL-1beta, IL-4, IL-10 e IL-18 por CMSP nos sobrenadantes de cultura. Ainda, foi utilizado o arranjo de PCR em tempo real customizado para avaliar a expressão de mRNA de genes relacionados à apoptose, citocinas, quimiocinas e receptores, além de proteínas de choque térmico, fatores de transcrição e inibidor de transcrição. Não foram encontradas diferenças entre os grupos SP e PC na produção de IL-4 e IL- 1beta por CMSP estimuladas com rHmuY. Níveis mais elevados de IL-18 foram significativamente induzidos por HmuY e na ausência de estimulação em células do grupo PC. Os níveis de IL-10 foram reduzidos no grupo PC nas células estimuladas com HmuY e houve uma tendência para significância estatística para níveis baixos desta citocina nas células não estimuladas do grupo PC. A expressão de mRNA para CCL2 aumentou significativamente em CMSP sob estímulo HmuY e o mRNA para NFKBIL1 diminuiu significativamente nestas células sob o mesmo estímulo no grupo PC. Entretanto, houve uma tendência para significância estatística para níveis baixos de expressão de mRNA para IL-10 e IL-18 em CMSP em PC. Em comparação com os controles SP, os pacientes do grupo PC apresentaram baixos níveis de expressão de genes relacionados a apoptose (FAS, FAS-LG, TNFSF10 (TRAIL), BAK1, CASP9 e APAF1) quando as CMSP foram estimuladas com HmuY. Ainda, as células de pacientes do grupo PC apresentaram baixos níveis de expressão do gene CASP7 quando as células não foram estimuladas. Nossos achados sugerem que HmuY de Porphyromonas gingivalis pode ter um papel importante na modulação das vias intrínseca e extrínseca de apoptose e que esta proteína estimula resposta inflamatória no hospedeiro.