Avaliação metabolômica do plasma de crianças e adolescentes com anemia falciforme - Souza, Alzenir Rodrigues (2021)
A anemia falciforme constitui um tipo de anemia em que a hemácia adquire a forma de foice, levando a vaso-oclusão, isquemia e inflamação; equivale a uma anemia hemolítica. Atinge uma parcela significativa da população brasileira, sendo necessária uma maior atenção para esta doença no ramo da pesquisa. A hidroxiureia é um medicamento eficaz no tratamento da anemia falciforme e melhora a qualidade de vida dos pacientes. Torna-se relevante a análise metabolômica voltada para esta doença, incluindo o estudo do metabolôma dos pacientes que utilizam este medicamento, já que o estudo das alterações do conjunto de metabólitos do plasma sanguíneo pode contribuir para o diagnóstico da doença e desenvolvimento terapêutico. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi realizar a análise metabolômica do plasma de crianças e adolescentes divididos em três grupos: pacientes com anemia falciforme que não utilizam a hidroxiureia (SCD); pacientes com anemia falciforme que utilizam a hidroxiureia (SCD_HDU); e indivíduos que não possuem anemia falciforme (controle). O sangue foi coletado das referidas crianças e adolescentes na faixa etária de 6 a 18 anos, e as amostras de plasma sanguíneo foram liofilizadas e submetidas a precipitação de proteínas e subsequente análise por Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio (RMN de 1H). Antes desta análise realizou-se a otimização de protocolo da aquisição de espectros, sendo selecionada a sequência de pulso Noesypr 1d, dentre as demais. Os espectros foram processados em diversas plataformas on-line de análises metabolômicas visando a identificação e a quantificação de metabólitos, bem como a realização das análises estatísticas multivariadas. Para tanto, utilizou-se o programa Chenomx suíte 8.4, e antes da quantificação foi feito o alinhamento de picos, ambos realizados no programa NMRProcFlow. As análises estatísticas multivariadas foram realizadas no programa MetaboAnalyst 2,0 e incluiram PLS-DA, validação cruzada, VIP scores e mapa de calor. Vinte e quatro metabólitos foram identificados, incluindo dez ácidos orgânicos, oito aminoácidos, além de outros compostos orgânicos. Através das análises estatísticas multivariadas foi possível comparar o conjunto de metabólitos dos grupos de participantes. A análise de PLS-DA revelou dissimilaridades no perfil metabólico do grupo controle e os grupos SCA e SCA_HDU. A análise dos três grupos resultou em oito metabólitos com VIP scores maiores ou iguais a 1, dentre os quais a leucina/isoleucina, prolina, ácidos graxos, creatina/creatinina, histidina, ácido 3-hidroxibutírico, glicerol e acetona. De acordo com o mapa de calor, a leucina/isoleucina, prolina, ácidos graxos, creatina/creatinina e glicerol possuem maiores concentrações no grupo SCD_HDU, e a histidina, ácido 3-hidroxibutírico e acetona possuem maiores concentrações no grupo controle. Este trabalho mostra a utilidade da análise metabolômica para a detecção de biomarcadores da anemia falciforme. Podem ser encontrados metabólitos com suas respectivas quantidades comparativas entre os grupos, característicos da anemia falciforme, bem como observadas as alterações do conjunto de metabólitos dos participantes, devido o uso da hidroxiureia. Os resultados descritos neste trabalho podem contribuir no diagnóstico e desenvolvimento terapêutico da doença, servindo como base para futuras investigações que envolvem o tema desta pesquisa.