Produção de Glicose Oxidase (E.C. 1.1.3.4) por fungos isolados da Floresta Amazônica - Sousa, Diego Rayan Teixeira de (2017)
A glicose oxidase (GOx) possui diversas aplicações industriais. Acredita-se que existem diversificadas espécies fúngicas que possuem capacidade de produzir essa enzima e a maior parte encontra-se inexplorada. Este trabalho teve como finalidade investigar a produção de Glicose Oxidase (EC 1.1.3.4) por fungos isolados de amostras de solo da Floresta Amazônica. Foram isolados fungos filamentosos de amostras de solo da Reserva Florestal Adolpho Ducke, localizada na cidade de Manaus-Amazonas. Para selecionar bons produtores de GOx, esses foram submetidos em cultivo submerso. Os isolados destacados na produção da enzima foram submetidos a ensaios de cinética onde foi avaliada a produção da mesma, biomassa e o consumo do substrato pelos isolados. Ensaios univariados e multivariados foram realizados para otimizar o processo de produção. Uma produção enzimática foi realizada utilizando processo semi-contínuo. A enzima bruta foi purificada pelos processos de precipitação, diálise cromatografia de troca iônica. Foram investigadas as características bioquímicas da GOx (melhor temperatura, melhor pH, estabilidade e o efeito de íons na atividade enzimática). Analisou-se o potencial desta enzima na elaboração de um Kit de quantificação de Glicose através de curvas de calibração, o coeficiente de regressão e coeficiente de correlação. Quanto aos resultados obtidos, foi detectada a produção de GOx em todas as cepas analisadas, entretanto, apenas sete se destacaram como potenciais produtores desta enzima, sendo cinco do gênero Aspergillus e dois do gênero Penicillium, com valores que variaram de 14,93 U/mL – 35,54 U/mL. A cinética demonstrou que o isolado Aspergillus LMM01 foi o melhor produtor da enzima, sendo portanto este isolado, utilizado nos experimentos posteriores. Experiências multivariadas demonstraram que os parâmetros com maior efeito na produção de GOx foram o pH e a agitação. Obteve-se um resultado estável para GOx (7,74 U/mL), durante 7 dias, utilizando o processo semi-contínuo. Após o processo de purificação, a atividade da enzima melhorou 938%, a temperatura de 40° C e o pH 6,0 foram os melhores para a ação catalítica da enzima e a estabilidade apresentou-se adequada as suas principais necessidades industriais. Os íons Fe+++, Pb++, Ag+, Hg++ e Cu++ exibiram inibição significante na atividade de GOx. No presente estudo, a correlação de Pearson do Kit desenvolvido e o Kit comercial foi forte positiva, com valor de r = 0,9978. Os resultados foram compatíveis com a literatura, onde destacam-se os gêneros Aspergillus e Penicillium como os principais produtores industrias de GOx.