Construção de um sistema de veiculação e expressão de DNAzimas para Escherichia coli: um protótipo para a fagoterapia - Oliveira, Hugo Valério Corrêa de (2013)
Os oligonucleotídeos antissenso apresentam grande potencial para serem utilizados como agentes terapêuticos. As DNAzimas 10-23 são as moléculas antissenso com maior estabilidade química e eficiência catalítica. Neste trabalho foi desenvolvido um sistema para a expressão de DNAzimas regulado por dois promotores, construído dentro de um fagomídeo que foi denominado pDESCP. A expressão da enzima MoMuLV-RT ocorre de forma constitutiva, por meio do promotor pA1. O segundo cassete, regulado pelo promotor lac, expressa um transcrito de RNA que originará a DNAzima. MoMuLV-RT atuará sobre o substrato de RNA, produzindo DNAzimas por meio da transcrição reversa. A DNAzima ftsZ, utilizada para validar esse sistema, foi eficientemente expressa e capaz de alterar a morfologia de Escherichia coli, que passou da forma bacilar para a filamentosa. Quando devidamente encapsidado pelo fago M13, pDESCP foi utilizado para transfectar diferentes linhagens E. coli F+. Ensaios cinéticos in vitro envolvendo DNAzimas com alvo sobre os transcritos dos genes de alanina racemase de E. coli, alr e dadX, não demonstraram resultados conclusivos. Isto impossibilitou que estas fossem testadas no fagomídeo. A veiculação de pDESCP para E. coli F+ e a possibilidade de inserção de novas DNAzimas em sua estrutura transformam este fagomídeo em um importante protótipo para a fagotarapia. Na condição de que DNAzimas letais sejam desenvolvidas contra E. coli, estas podem ser inseridas em pDESCP e transformá-lo em uma poderosa ferramenta capaz de impedir a transmissão de genes de patogenicidade, a partir de bactérias conjugativas.