Desenvolvimento de um probiótico recombinante contendo a Proteína “3” de superfície de merozoíto de Plasmodium falciparum e avaliação imunológica em murinos - Alves, Késsia Caroline Souza (2022)
A malária é um problema de saúde pública amplamente distribuída nas regiões tropicais e subtropicais no mundo. No Brasil, a doença ainda apresenta elevados números de casos, no qual o Plasmodium falciparum (P. falciparum) é responsável pela forma mais grave da doença. Uma das alternativas para controle da infecção seria o desenvolvimento de uma vacina. Atualmente, ainda não existe vacina para malária com 100% de proteção. Uma etapa importante no desenvolvimento de uma vacina, além na identificação do antígeno é avaliar como o antígeno será apresentado, bem como o efeito imunoestimulatório dos componentes da formulação (imunoestimulantes). Um dos métodos de imunoestimulação e apresentação que tem recebido atenção é baseado no uso de esporos de Bacillus subtilis. Além disso, tem-se observado que estes podem atuar como partículas vacinais adjuvantes, promovendo a elevação da resposta humoral após a co-administração com antígenos tanto acoplados ou integrados à superfície desses esporos. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram produzir anticorpos contra proteína 3 de superfície de merozoíto (MSP3) de Plasmodium falciparum utilizando esporos de B. subtilis recombinados, além de padronizar uma metodologia de quantificação dos esporos por citometria de fluxo. Foi realizada a padronização de uma metodologia de quantificação de esporos na qual foi utilizado Beads Trucount junto a uma dupla marcação dos esporos com brometo de etídio e anticorpo fluorescente, os esporos foram submetidos a leitura em citometria de fluxo. Aplicando a metodologia foi obtida uma maior acurácia na quantificação dos esporos, além de uma análise mais confiável de acoplamento do anticorpo fluorescente na superfície dos esporos. A construção da cepa de B. subtilis recombinante foi realizada por meio de endereçamento devido a fusão com a proteína revestimento CotC. A expressão da proteína de forma íntegra na superfície do esporo foi realizada por immunoblot. Camundongos Balb/C foram imunizados com os esporos recombinantes por via nasal e oral e os soros coletados foram analisados por ELISA indireto. Como resultado, foi observado que tanto camundongos imunizados por via oral quanto nasal apresentaram estimulação de IgG antiPfMSP3, se apresentando mais elevada na via oral. Além disso, os esporos foram capazes de manter títulos de IgG circulantes por 250 dias, desencadeando um perfil de resposta imune predominante Th1. Com os resultados promissores apresentados neste trabalho, os esporos de B. subtilis podem ser uma ótima ferramenta a ser aplicada em futuras vacinas para malária.