Seleção de isolados fúngicos amazônicos produtores de lipases para biocatálise enantiosseletiva em meio orgânico - Romano, Israel Paes (2020)
Lipases (3.1.1.3) são enzimas altamente versáteis para biocatálise. A atividade sintética e enantiosseletiva destas enzimas em meio orgânico tem aplicação na obtenção de substâncias químicas de alto valor agregado, como blocos quirais para síntese e fármacos enantiopuros. A procura por microrganismos fornecedores de novas lipases úteis para a biotecnologia continua sendo um tópico de grande relevância. Neste estudo, foi investigado o potencial da biomassa de seis linhagens de Aspergillus e de quatorze linhagens fúngicas não-identificadas, todas coletadas na região amazônica, como fonte de lipases ligada ao micélio para aplicações em biocatálise, tanto em meio aquoso (atividade hidrolítica) como em meio orgânico (atividade sintética e enantiosseletiva). Compararam-se os efeitos de três tratamentos da biomassa sobre a atividade hidrolítica. A atividade sintética foi avaliada por um ensaio de transesterificação e quantificada por duas metodologias diferentes. A capacidade enantiosseletiva das lipases foi avaliada por meio da resolução do fármaco (R,S)- ibuprofeno. Verificou-se que, para quinze isolados, a biomassa submetida ao tratamento de remoção de lipídios superficiais (delipidação) apresentou melhores resultados na hidrólise do palmitato de p-nitrofenila, em comparação com os outros dois tratamentos. A biomassa delipidada de seis linhagens de Aspergillus e da linhagem UEA_115 apresentou elevada atividade de síntese de palmitato de etila por transesterificação em meio orgânico. Os resultados foram confirmados por espectrofotometria (410 nm) e cromatografia gasosa. Nesta reação, o isolado DPUA_1539 A. flavo-furcatis alcançou o valor máximo de 668,5±23,5 mU.g-1. Os ensaios de atividade enantiosseletiva indicaram que lipases ligadas a biomassa dos isolados UEA_115 (E= 3,58; ees = 7±0) e, em especial, do isolado DPUA_1539 A. flavo-furcatis (E= 24,15; ees = 91±1), possuem a capacidade de discriminar os enantiômeros do fármaco ibuprofeno pela síntese de éster, preferencialmente com o (R)-enantiômero. Estes resultados encorajam investigações adicionais destes fungos como potenciais fornecedores de lipase para processos biocatalíticos, como a produção de biodiesel e a obtenção de fármacos enantiopuros.