Avaliação anti-leishmania in vitro e in vivo de Libidibia ferrea e estudo de formulações tópicas para o tratamento da forma cutânea da Leishmaniose. - Wyrepkowski, Claudia Dantas Comandolli (2016)
A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma protozoonose causada por parasitas do gênero Leishmania, que são transmitidos ao homem pela picada do inseto flebotomíneo. Na LTA, os pacientes podem apresentar a forma cutânea, com lesões localizadas na pele que podem evoluir para lesões crônicas. O tratamento de primeira escolha são antimoniais pentavalentes e os fármacos de segunda escolha são pentamidina e anfotericina B, porém todos apresentam efeitos colaterais e requerem administração parenteral. Os produtos naturais apresentam-se como uma alternativa para o tratamento de inúmeras enfermidades, e há trabalhos que demonstram potencial contra Leishmania. Na região Amazônica, a espécie Libidibia ferrea (Mart. ex Tul) LP Queiroz destaca-se pela sua importância econômica e farmacológica, devido à atividade anti-inflamatória e antimicrobiana relatada. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a atividade de extratos e frações de L. ferrea contra promastigotas e amastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) guyanensis, realizando também a sua caracterização química, e estudar o efeito in vivo de formulações tópicas contendo pentamidina, os extratos e frações mais promissoras. Foram preparados extratos hexânicos e metanólicos do epicarpo, folhas e galhos de L. ferrea, os quais foram submetidos a bioensaios in vitro contra promastigotas e amastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) guyanensis, pelo método da contagem direta. Os extratos mais ativos foram avaliados in vitro quanto a atividade citotóxica em macrófagos de linhagem J774. Os extratos e frações ativos foram analisados por CCDC, quantificados o teor de fenólicos e flavonoides, e analisados por RMN e CLAE. Os ensaios in vivo empregaram hamsters como modelo animal, infectados com L. (L.) amazonensis. Foram preparadas e avaliadas por aplicação tópica nas lesões, inicialmente, emulsões hidratantes e anidras contendo isetionato de pentamidina (10%). Os resultados dos bioensaios demostraram que o extrato metanólico de epicarpo (EpMeOH) apresentou maior atividade frente as espécies de Leishmania, com EC50 de 15,01 µg/mL contra L (L.) amazonensis. Este extrato apresentou a maior concentração de fenólicos (5,14%). A fração 2-DCM demonstrou também atividade, com EC50 12,77 µg/mL contra L. (L.) amazonensis. Não foi observada atividade citotóxica em macrófagos para ambas as amostras. As emulsões hidratantes contendo pentamidina foram mais eficientes, embora fossem detectados parasitas viáveis em todos os grupos após oito dias de tratamento. Estas emulsões hidratantes foram utilizadas como base para cremes com adição de 2,5% do extrato EpMeOH e avaliados em duas áreas com lesões cutâneas - focinho e pata. Os grupos tratados com creme com extrato EpMeOH (2,5%) e o placebo mostraram diferenças quanto ao volume da lesão quando comparados ao grupo controle após 20 dias de tratamento, mas mostraram a presença de parasitas, sem diferença estatística entre o grupo controle. Estes resultados sugerem que o tempo de tratamento e a concentração do extrato devem ser aumentadas, além da proporção do uso do extrato EpMeOH em uma formulação mais hidrofílica. O hidrogel EpMeOH foi avaliado em lesões no focinho de hamsters, assim como emulsão Fr2. Após 40 dias de tratamento, os grupos tratados com estas formulações tópicas mostraram diferenças estatísticas entre o grupo controle e também entre seus respectivos placebos, quanto ao volume, aspecto clínico da lesão, e quanto à quantificação parasitária. Menor infiltrado inflamatório foi observado no grupo hidrogel EpMeOH. Este estudo permitiu identificar o extratos promissores no tratamento da leishmaniose tegumentar experimental e corrobora apontando novas oportunidades e inovação servindo como base para formulações de fitoterápicos para o tratamento desta doença negligenciada.