Esteroide, alcaloides e atividade biológica de fungos endofíticos de Palicourea corymbifera (Rubiaceae) - Silva, Weison Lima da (2020)
Este trabalho descreve a triagem realizada com 32 fungos endofíticos de folhas da espécie vegetal Palicourea corymbifera a fim de selecionar fungos de interesse para a produção de substâncias com aplicações biotecnológicas. Foram isolados 17 morfotipos crescidos em ágar sabouraud (AS) e 15 em ágar batata dextrose (AB). Em um primeiro momento foi realizada uma seleção química quanto a presença de metabólitos relevantes. Os fungos crescidos em AS foram cultivados em meio líquido sabouraud e aqueles isolados em AB foram cultivados em meio líquido de batata, ambos meios acrescidos com 0,2% de extrato de levedura (EL). Os extratos dos micélios e caldos foram avaliados quimicamente por cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e por ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN de 1H). A partir do resultado da triagem química foram selecionados 3 fungos codificados como SBPC15, SBPC16 e BDPC15. Com intuito de serem identificados e para se ter aumento na produção de biomassa. Esses três fungos foram cultivados em condições de temperatura (30 °C), tempo (20 dias) e agitação (agitador orbital 120 rpm) iguais. Onde a diferença foi quanto aos meios de cultura utilizados. O fungo SBPC15 foi cultivado em caldo sabouraud acrescido de 0,2% de extrato de levedura. O fungo SBPC16 foi cultivado em caldo sabouraud acrescido de 0,2% de extrato de levedura, e em meio líquido contendo glicose, extrato de levedura e peptona. O fungo BDPC15 foi cultivado em caldo de batata acrescido com 0,2% de extrato de levedura e caldo sabouraud acrescido de 0,2% de extrato de levedura. O extrato AcOEt de caldo do fungo (SBPC15) foi fracionado e foram obtidas as substâncias: tiramina (I) e ciclo prolina tirosina (II). Para o fungo BDPC15 cultivado em meio líquido de batata, tanto do fracionamento do extrato DCM de oriundo do caldo quanto o extrato DCM de micélio foi obtida a substância citocalasina D (III). Ainda do fungo supracitado cultivado em meio líquido sabouraud, do fracionamento do extrato AcOEt de micélio foi obtida também a citocalasina D (III). Para o fungo SBPC16 do cultivo realizado em sabouraud, do fracionamento do extrato AcOEt de micélio foi obtida a substância 1H-indol-3-acetamida (IV). Ainda do SBPC 15 cultivado em meio líquido contendo glicose, extrato de levedura e peptona, o extrato MeOH de micélio foi submetido a uma partição líquido/líquido, do fracionamento da fase AcOEt foi obtida a substância ergosterol (V). Parte dos extratos dos micélios (DCM, AcOEt e MeOH) e extratos dos caldos (DCM e AcOEt) assim como as substâncias isoladas foram submetidos a bioensaios quanto as atividades: antimicrobiana por microdiluição em caldo, ensaio angiogênico pelo método da membrana corioalantoica e de fitotoxicidade. Os fungos selecionados foram identificados quanto sua taxonômia como sendo: Xylaria sp. 1 (SBPC15), Xylaria sp. 2 (BDPC15) e Colletotrichum dianesei (SBPC15). No ensaio antimicrobiano os extratos do fungo Xylaria sp. 1 quatro bactérias foram sensíveis; Acinetobacter baumani, Edwardsiella tarda, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus, e um fungo: Candida albicans. Para o fungo Colletotrichum dianesei os extratos apresentaram atividade contra cinco bactérias patogênicas: Acinetobacter baumani, Edwardsiella tarda, Pseudomonas fluorescens, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus. Para o teste antimicrobiano com as substâncias: citocalasina D e ergosterol, nenhuma apresentou atividade inibitória de crescimento contra as cepas avaliadas. No ensaio de fitotoxicidade os extratos do fungo Xylaria sp. 1, promoveram uma redução na velocidade de germinação e no crescimento de Lactuca sativa. Na abordagem utilizando substâncias, a citocalasina D provocou necrose radicular em L. sativa. No ensaio de atividade de angiogênese a indol acetamida apresentou atividade antiangiogênica. Os resultados desta pesquisa reforçam a potencialidade biotecnológica dos fungos endofíticos da Amazônia. Fato comprovado através da obtenção de substâncias, algumas com realidade comercial já estabelecida e outras que podem ser moléculas protótipas para produção de outras estruturas químicas com possível bioatividade.