Diagnóstico viral e limpeza clonal de matrizes de maracujazeiro (Passiflora edulis Sims) utilizadas na produção de sementes híbridas - Ribeiro, Elias da Cruz (2021)
Este trabalho teve por objetivo realizar o diagnóstico viral e a limpeza clonal de matrizes de maracujazeiro (Passiflora edulis Sims) utilizadas na produção de sementes híbridas. Para a realização do diagnóstico viral, folhas dos genótipos CPMSC1, CPGA1, MR1, CPMGA2 e CPF1SSBR foram coletadas e o RNA e DNA extraídos para a detecção viral por RT-PCR e PCR, utilizando primers que codificam regiões genômicas de Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), Lettuce chlorosis virus (LCV) e Begomovirus. Complementarmente, os resultados obtidos para os primers de CABMV foram hibridizados por Southern blot para um diagnóstico mais confiável. Os resultados revelaram a presença de CABMV em 100% das amostras de todas as matrizes testadas. Além disso, amostras de CPGA1 (17%) e de CPMSC (11%) foram positivas utilizando os primers universais de begomovírus. Nenhuma amostra foi positiva para LCV. Num segundo experimento, um protocolo para a micropropagação dos genótipos foi desenvolvido, visando a posterior multiplicação das matrizes oriundas da limpeza clonal. Para tanto, inicialmente foi avaliado o melhor explante para a fase de o estabelecimento e multiplicação in vitro. Verificou-se que o desenvolvimento de gemas preexistentes foi observado apenas nas microestacas, em relação à inoculação de gemas isoladas, gerando brotos com tamanho médio de 7 mm após 45 dias de cultivo. Em seguida, apenas as microestacas foram utilizadas em novo experimento para o estabelecimento in vitro em meio de MS acrescido de 4,43 μM de BAP. Nele, observou-se o desenvolvimento de brotos com pelo menos 6 mm após 30 dias de cultivo. O material proveniente destas microestacas foi utilizado para os demais experimentos de multiplicação, alongamento e enraizamento. Por fim, para testar a eficiência da cultura de ápices caulinares na eliminação do CABMV nas matrizes previamente diagnosticadas, ápices caulinares (0,1 - 0,3 mm) foram isolados e inoculados em meio de MS acrescido de 0,05 μM de ANA, 0,44 μM de BAP e 0,28 μM de AG3. Após a regeneração do meristema apical, os explantes foram transferidos para meio de MS acrescido de 4,43 μM de BAP para indução de proliferação de gemas e multiplicação. Agregados de gemas provenientes da cultura de ápices caulinares foram utilizados para indexação do material vegetal para o vírus CABMV por meio de RT-PCR. Os resultados observados demonstraram diminuição na intensidade das bandas referentes ao CABMV nos genótipos CPGA1, MR1 e CPMGA2, indicando diminuição de carga viral. Por fim, a limpeza viral foi observada em apenas uma amostra do genótipo CPGA1.