Análise imunoproteômica das proteínas de superfície do Aspergillus fumigatus utilizando soro de pacientes com aspergilose invasiva - Virginio, Emylli Dias (2013)
Aspergillus fumigatus é um fungo filamentoso saprófito amplamente distribuído no mundo, este micro-organismo é o principal agente etiológico de um grupo de doenças denominado aspergilose. A aspergilose invasiva é uma infecção pulmonar ou sistêmica de alta gravidade que afeta pacientes imunocomprometidos, principalmente pacientes com malignidades hematológicas ou transplantados de células tronco hematopoiética (TCTH). Os sintomas da aspergilose invasiva geralmente são inespecíficos ou estão mascarados pelos tratamentos antifúngicos empiricamente administrados, tornando difícil seu diagnóstico. O objetivo deste estudo foi investigar e identificar proteínas antigênicas, na busca de possíveis candidatos a biomarcadores para o diagnóstico da aspergilose invasiva. Para isso, neste estudo, utilizamos extrato de tubos germinativos do A. fumigatus (TG6h) e uma abordagem imunoproteômica. Os 2-D western immunoblots foram realizados utilizando-se soro de pacientes classificados como provável e provado de acordo com os critérios da Organização Européia para Pesquisa no Tratamento do Câncer (EORTC) e do Grupo de Estudo de Micoses (MSG). Também foram utilizados soros de pacientes saudáveis, como controle negativo e soro de pacientes com outras micoses, a fim de verificar possíveis reações cruzadas para os antígenos identificados. Soros de pacientes hematológicos do Instituto Nacional do Câncer (INCA) foram coletados duas vezes por semana e a presença de galactomanana (GM) sérica foi analisada utilizando o Platelia® Aspergillus (Bio-Rad). Foram selecionados para este estudo os pacientes com, no mínimo, dois resultados positivos para GM e com informação suficiente para completar os critérios de classificação do EORTC/MSG. Dezesseis pacientes foram incluídos: treze classificados como provável e três como provado para aspergilose invasiva. Os soros dos pacientes classificados como prováveis foram ainda separados de acordo com o estado de neutropenia do paciente. Vinte e cinco proteínas antigênicas foram identificadas por MS/MS, incluindo proteínas envolvidas no transporte de íons, sinalização celular, modelagem e hidrólise de proteínas, entre outras. Quatorze proteínas antigênicas foram reconhecidas exclusivamente pelos pools de soro dos pacientes classificados como provado e provável (neutropênico e não-neutropênico). Três destes antígenos foram apontadas como possíveis candidatas a marcadores para o diagnóstico de infecções fúngicas, em geral: beta-glucosidase; a proteína Sqt1 e a fosfatase 2C. Um outro antígeno, o citocromo P450, está sendo descrito pela primeira vez como antígeno de A. fumigatus, sendo a principal candidata a biomarcador para o diagnóstico da aspergilose invasiva, gerando um pedido de patente (em andamento).