Investigação de aspectos fitoquímicos e do potencial farmacológico de materiais obtidos in vivo, in vitro e criopreservados de Passiflora pohlii Mast. - Simão, Mariela Justiniano (2019)
Passiflora pohlii Mast. é uma espécie nativa do Brasil que apresenta características de interesse agronômico, principalmente em relação à tolerância a patógenos do solo que provocam grandes prejuízos à cultura de maracujá. Embora existam poucos trabalhos sobre esta espécie, estudos biotecnológicos recentes resultaram no desenvolvimento de sistemas para a produção in vitro de plantas e de cultura de raízes adventícias. Além disso, o perfil fitoquímico e potencial antioxidante de diferentes materiais in vitro foi comparado com o de plantas mantidas em condições naturais, sendo observada a presença de flavonoides em extratos de folhas, e de saponinas, com alta atividade antioxidante, em extratos de raízes. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi o aprofundamento dos estudos já realizados, com o estabelecimento de novos sistemas de cultura e de criopreservação para P. pohlii, com a investigação de aspectos fitoquímicos e histológicos, e do potencial farmacológico de materiais obtidos in vivo e produzidos e conservados in vitro. Para isso, a técnica de Ressonância Magnética Nuclear foi utilizada visando à elucidação estrutural dos flavonoides presentes nos extratos de folhas da espécie estudada. Foram identificados dois isômeros, denominados iso-spinosina, a substância majoritária, e spinosina. Posteriormente, segmentos foliares foram excisados de plantas propagadas in vitro e cultivados na presença de auxinas e elevadas concentrações de sacarose visando ao estabelecimento de culturas de calos para a produção em larga escala de substâncias bioativas. Apesar da indução de calos friáveis ter ocorrido em resposta a ANA e PIC, calos obtidos na presença de PIC a 20,7 μM e sacarose a 0,3 ou 0,5 M apresentaram intensa proliferação celular e a produção de substâncias fenólicas com potencial antioxidante. No entanto, não foi observada a produção dos flavonoides nestes materiais. Considerando a recente descrição da presença de saponinas em extratos de raízes de P. pohlii, foi também estabelecida uma metodologia para a criopreservação de ápices radiculares de plantas in vitro pela técnica de V-Crioplaca, utilizando PVS2 como solução crioprotetora. Foi obtida uma alta taxa de recuperação, indicando a eficiência da metodologia para o armazenamento em longo prazo desses materiais biotecnológicos. Análises histológicas realizadas durante as diferentes etapas do protocolo evidenciaram danos estruturais nos materiais criopreservados, incluindo altas taxas de plasmólise, os quais foram revertidos após transferência para meio de recuperação. Não foram observadas alterações na capacidade biossintética das raízes criopreservadas, quando comparadas aos materiais não-criopreservados. O potencial antibacteriano de folhas e raízes de plantas in vitro de P. pohlii também foi investigado e comparado com os de outras espécies do gênero. No entanto, extratos de P. pohlii promoveram um aumento no crescimento das cepas bacterianas testadas, ao contrário do observado nos materiais das outras espécies, principalmente daquelas pertencentes ao subgênero Passiflora, o que sugere uma influência genotípica na produção de substâncias com ação antibacteriana. As estratégias biotecnológicas descritas neste trabalho foram aplicadas com sucesso para a produção e a conservação in vitro de substâncias fenólicas com ação antioxidante de P. pohlii. Além disso, a identificação dos flavonoides presentes em extratos de folhas foi realizada pela primeira vez para a espécie.