Caracterização morfológica e funcional de células do infiltrado inflamatório na lesão da hanseníase - Moura, Danielle Fonseca de (2006)
A hanseníase apresenta um amplo espectro de formas clínicas que possuem diferenças histopatológicas entre si. Neste contexto, os macrófagos (Mф) da pele de pacientes paucibacilares e multibacilares possuem uma resposta diferenciada à infecção pelo Mycobacterium leprae. Além disso, a relação do Mф com outras células da pele pode exercer papel chave no desenvolvimento da resposta imunológica local nestes grupos de pacientes. Desta forma, a caracterização morfológica e funcional destes Mф é crucial para um melhor entendimento da lesão tecidual na hanseníase. Por dissociação enzimática, células da lesão de pacientes paucibacilares (n=3), multibacilares (n=13) e durante o episódio reacional (ENL; n=5) foram isoladas. Para a análise morfológica e funcional desta amostra foram realizadas colorações por Giemsa e Ziehl-Neelsen, assim como, citometria de fluxo, imunocitoquímica, ELISA e PCR em tempo real. Em paralelo, fragmentos de pele utilizados para a cultura, foram armazenados e processados para análise histopatológica e avaliação por RT-PCR em tempo real. Aproximadamente 40-50% da população nos grupos utilizados era CD14+, característico de Mф. A análise das células e CD3+ (linfócito) mostraram uma maior porcentagem desta população em pacientes paucibacilares. O inverso foi observado para células CD56+ (células NK) onde a maior porcentagem foi verificada em multibacilares. Além disso, também foi analisada a expressão de TLR-2 e TLR-4, onde foi verificado que a porcentagem de células TLR2+ era maior do que a TLR-4+ em pacientes pauci e multibacilares. No entanto, em pacientes com ENL foi encontrada uma maior porcentagem de células TLR4+ o que pode estar relacionado com a hiper reatividade da resposta imuno-inflamatória. Coloração por Giemsa e Ziehl-Neelsen mostraram características morfológicas de M durante o tempo de cultura e a detecção de bacilos nestas células em pacientes multibacilares respectivamente. Além disso, as células apresentavam intensa marcação para CD68 por imunocitoquímica. Durante o período de cultura as células secretaram TNFα, IFNγ e IL-10, assim como mediadores inflamatórios. A expressão gênica para as mesmas citocinas analisadas foi feita por PCR em tempo real, onde ocorreu um aumento na expressão de TNFα IFNγ em células de paucibacilares comparados a multibacilares e uma maior expressão de IL-10 em multibacilares. Um perfil semelhante ao dos pacientes multibacilares foi observado nos pacientes com ENL e em biópsias de pele. A análise da secreção de TNFα, IFNγ e IL-10 foi realizada e o mesmo perfil da análise por RT-PCR foi mantido. Estes dados confirmam perfis diferentes de Mф isolados da pele de pacientes paucibacilares e multibacilares da mesma forma que é observado na lesão tecidual na hanseníase.