Avaliação de mecanismos de regulação de SPRR3 em carcinoma epidermoide de esôfago - Lisboa, Lilian Brewer (2018)
Câncer de esôfago (CE) é o oitavo tumor mais frequente e representa a sexta causa de morte relacionada ao câncer, sendo o carcinoma epidermoide de esôfago (CEE) correspondente a 80% dos casos. SPRR3 é uma proteína associada à diferenciação epitelial terminal, e a perda gradual da expressão, tanto gênica quanto proteica, de SPRR3 na transformação maligna das células escamosas da mucosa do esofâgo saudavel já foi vista em alguns trabalhos. No entanto, estudos sobre os mecanismos moleculares envolvidos na regulação de SPRR3 são limitados. Logo, o alvo desse estudo foi investigar possíveis mecanismos relacionados à regulação deste gene. Inicialmente, após identificarmos a diminuição da expressão gênica de SPRR3 em 35 amostras de CEE quando comparadas as respectivas mucosas adjacentes não tumorais, avaliamos os níveis de metilação de DNA em 3 regiões (A e B – região promotora e C – região 5’UTR) desse gene por pirosequenciamento nessas mesmas amostras. Os resultados mostraram uma correlação inversa entre níveis de metilação de SPRR3 e sua expressão gênica nas 3 regiões analisadas. Em seguida avaliamos a expressão das três principais DNA metil-transferases (DNMTs), nesse mesmo grupo de amostras, e observamos correlação negativa entre a expressão de DNMT1, DNMT3A e DNMT3B com expressão genica de SPRR3 e correlações positivas em relação aos níveis de metilação de SPRR3, com exceção de DNMT3A e sítio C. A partir desses dados, fizemos o tratamento das linhagens celulares de CEE (OE21, TE1, TE13) com agente inibidor das DNMTs (decitabina). Este tratamento induziu demetilação nas células e aumento de expressão gênica de SPRR3. Em seguida avaliamos o envolvimento de miRNAs no silenciamento de SPRR3 e, analisando dados depositados no banco de dados TCGA, identificamos que miR-21 e miR-503 apresentaram correlação inversa com expressão de SPRR3. MiR-503 possui SPRR3 como alvo predito, enquanto que miR-21 parece atuar de forma indireta, conforme análise preditiva utilizando site MiRWalk. Este estudo também identificou, por meio de análise in silico utilizando os programas MatInspector e JASPAR, 24 fatores de transcrição que poderiam afetar a regulação da expressão de SPRR3. Dentre estes, 13 genes apresentaram correlação significativa com a expressão de SPRR3 em amostras de CEE. Identificamos o fator transcricional MEIS1 como possível alvo do miR-21 e que este poderia atuar na regulaçao de SPRR3. Como conclusão, podemos relacionar a redução da expressão de SPRR3 em CEE com a metilação do DNA mediada pelas DNMTs, assim como podemos sugerir o envolvimento de outros mecanismos no silenciamento deste gene, como a influência de fatores de transcrição e a ação direta e indireta de miRNAs.