Análise comparativa das propriedades fenotípicas e genotípicas de amostras de origem humana e animal de Streptococcus pseudoporcinus - Carvalho, Guilherme da Silva Lourenço (2017)
O gênero Streptococcus é alvo de constante reclassificações dentre suas espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar as características apresentadas por 24 amostras de Streptococcus pseudoporcinus, sendo 19 de origem humana, incluindo uma derivada da amostra tipo, e cinco de origem animal (isoladas de leite), em comparação com amostras de referência de Streptococcus porcinus. Estas amostras foram caracterizadas por testes fisiológicos, perfil total de proteínas por SDS-PAGE, susceptibilidade a antimicrobianos e atributos relacionados a virulência. Além disso, a técnica de MALDI-TOF foi utilizada na caracterização das amostras, aliado a análise filogenética e genômica comparativa in silico. Também foi analisado o perfil proteômico utilizando espectrometria de massa (ESI-Q-TOF). Dos testes fisiológicos utilizados, a hidrólise do hipurato foi o único capaz de diferenciar as espécies. Na metodologia de MALDI-TOF, os resultados obtidos revelaram valores de escores distintos dependendo do tipo do protocolo empregado. Extratos proteicos obtidos pelo tratamento com ácido fórmico e acetonitrila, demonstraram resultados eficazes. A partir dos espectros obtidos, foi determinada uma similaridade entre as amostras do estudo. Houve uma perfeita discriminação entre as amostras S. pseudoporcinus das de S. porcinus. Adicionalmente, as amostras de S. pseudoporcinus obtidas de leite mostraram uma maior correlação entre si. Os dados obtidos com a metodologia de MALDI-TOF foram também avaliados quanto à identificação de biomarcadores, demonstrando a presença de picos intra e inter-específicos. A análise dos perfis proteicos obtidos por SDS-PAGE revelou uma grande similaridade entre as espécies, não tendo sido suficientemente discriminatória. A análise pelo pareamento das sequências do gene rrs, disponibilizadas em bancos de dados públicos, revelou que as amostras de S. pseudoporcinus de fonte humana estão menos relacionadas com as amostras de fonte animal. Os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos demonstraram 66,0% de amostras de S. pseudoporcinus de origem humana resistentes à tetraciclina. Todas as amostras se mostraram capazes de formar biofilmes, sendo que a suplementação do meio de cultura com sacarose ou glicose aumenta consideravelmente a quantidade de biomassa aderida. As amostras tipo de ambas as espécies, quando cultivadas sob a forma de biofilmes apresentaram valores de concentração inibitória até 40.000 vezes maiores que células planctônicas. Diversas proteínas relacionadas a virulência foram identificadas pelas análises proteômica e genômica. Ambas as espécies foram capazes de aderir a células humanas. A genômica comparativa mostrou uma similaridade muito maior entre amostras de origem animal do que com amostras de origem humana de S. pseudoporcinus, tanto pelas sequências gênicas quanto pelas análises de predição de proteínas.