Citotoxicidade de micropartículas de poliméricas mucoadesivas para liberação controlada de nistatina - Bisetto, Paula (2020)
Micropartículas (MPs) poliméricas para liberação controlada de nistatina (N) foram testadas em relação a citototoxicidade nas suas concentrações inibitórias mínimas (CIM50 e CIM80 contra C. albicans) in vitro, pelos métodos Alamar Blue® e MTT. As MPs foram obtidas com os polímeros Eudragit L-100® (E), Gantrez MS-955® (G) ou da combinação de ambos (EG), acrescidos deN 10% ou a 20%. Queratinócitos humanos (NOK) foram proliferados in vitro e semeados (2 X 104cél/mL), em meio de cultura DEMEM com 10% de soro fetal bovino em placas de 96 orifícios e incubados durante 24 h, para semiconfluência. O meio de cultura foi substituído por meio novo (200 µl) contendo 2 µl de soluções-mãe, em DMSO, dos materiais estudados, para atingir as CIMs, conformando os grupos experimentais: GN1050, GN1080; GN2050, GN2080, EN1050, EN1080, EN2050, EN2080, EGN1050, EGN1080, EGN2050, EGN2080 (todas MPs com N) e G0 e E0 (MPs brancas, sem fármaco). O solvente também foi avaliado a 1% (grupo DMSO). Como grupo controle (C), foram cultivadas células que receberam somente o meio de cultura (100% de crescimento). Juntamente com os tratamentos, 20 µl do reagente Alamar Blue® foram adicionados aos poços contendo as células, que foram incubadas por 24 h. Leituras de fluorescência foram realizadas em 6 h, 12 h e 24 h (emissão de 544 nm e 590 nm de transmissão). No teste de MTT, o reagente foi inserido ao término do período de incubação com os tratamentos (24 h). Para isso, as células foram lavadas com PBS e receberam 200 µl de MTT a 0,5 mg/mL, foram seladas e voltaram à estufa por 4 h. A solução foi descartada e os cristais de formazan solubilizados em 200 µl de metanol, por 5 min. O sobrenadante foi lido a 570 nm. Os testes foram realizados em triplicata e em três ocasiões. As medidas de fluorescência ou de absorbância foram calculadas como porcentagem de inibição de atividade metabólica comparadas ao controle e classificadas qualitativamente. Os dados também foram analisados pelo teste Shapiro-Wilk, que mostrou distribuição não normal. Os testes complementares usados foram Kruskall Wallys e Friedman (α =0,05). Na análise qualitativa de citotoxicidade das leituras de fluorescência das diferentes MPs, nenhuma delas foi classificada como moderada ou altamente citotóxica. Na análise quantitativa inferencial, não houve diferença estatisticamente significativa entre a maior parte dos grupos avaliados nos períodos de tempo testados, mostrando um comportamento semelhante para a maioria das MPs, exceto as partículas EN2050, G050 e GN1050, que se apresentaram levemente citotóxicas no tempo de 6h. Nas leituras de absorbância, na análise qualitativa, as MPs apresentaram comportamento levemente ou não citotóxico. Já na análise quantitativa, as MPs mostraram diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo controle, mas não entre si. A MP GN1080 se apresentou não citotóxica em todos os testes. De acordo com os testes realizados no presente estudo, pode-se concluir que nenhuma MP testada foi classificada como moderada ou altamente citotóxica in vitro.