Diversidade genética e potencial simbiótico de bactérias de nódulos de Arachis spp. cultivados em solos do Semiárido - Santos, Jonnathan Whiny Moraes dos (2017)
Pertencente à família Fabaceae o amendoim (Arachis hypogaea) é cultivado mundialmente, tendo grande importância na geração de renda do produtor. Por ser uma cultura que se associa a bactérias que têm a capacidade de fixar nitrogênio, vem sendo estudada visando potencializar essa relação simbiótica e favorecer o aumento de sua produção. Dessa forma o objetivo desse trabalho foi avaliar a diversidade e a eficiência simbiótica de bactérias nativas associadas a espécies de Arachis. Foi estruturada uma coleção de bactérias isoladas de nódulos de 6 espécies do gênero Arachis cultivadas em amostras de 6 solos da região semiárida. Os isolados foram purificados e avaliados quanto às suas características fenotípicas, e amplificação de alguns genes simbióticos. Os isolados considerados nifH, nodA e/ou nodC positivos foram selecionados para o teste de eficiência simbiótica, assim como para as reações de sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. Bactérias selecionadas nas avaliações anteriores foram testadas em um experimento em casa de vegetação para avaliar a eficiência simbiótica. As bactérias classificadas como Bradyrhizobium, o gene 16S rRNA foi sequenciado também no sentido reverso. Além disso, foram amplificados e sequenciados também, os genes recA, nifD e nodC. Para estes mesmos isolados, foi realizado um BOX-PCR, para verificar diferenças entre esses isolados. A partir desses resultados foram elaboradas as árvores filogenéticas com base nesses genes. Uma coleção de 365 isolados foi obtida sendo que a maioria dos isolados apresentaram crescimento rápido, acidificaram o meio de cultura, tinham diâmetro de colônia de 1 a 2mm, além de apresentarem coloração amarela. Do total de isolados, 253 tiveram amplificação em pelo menos uns dos genes simbióticos avaliados, 94 isolados amplificaram para todos os genes e iniciadores avaliados. Um total de 63 isolados foram selecionados para sequenciamento do gene 16S rRNA, assim como para a avaliação da eficiência simbiótica em casa de vegetação. A partir dos resultados obtidos, 45 sequências apresentaram boa qualidade e tamanho adequado e foram utilizadas para a comparação com aquelas disponíveis no banco de dados EzBioCloud. Um total de 22 isolados foram identificados como pertencentes ao gênero Bradyrhizobium, sendo 21 enquadrados no clado I B. japonicum e apenas 1 no clado II B. elkanii, e outros 23 como pertencentes a gêneros não rizobianos. A partir do sequenciamento dos genes simbióticos, verificou-se que alguns isolados que tiveram amplificações nos três genes avaliados, como os isolados S2AB2, S2AD 2, S2AH 9.1 e S2AH 4.1, permaneceram em grupos distintos em todas as três árvores dos genes simbióticos, assim como também na árvore do gene 16S rRNA, confirmando a baixa similaridade desses isolados com as estirpes tipo, indicando que são possivelmente isolados de novas espécies. Com o BOX-PCR foi confirmado que os isolados apresentavam alto grau de polimorfismo, e que estes realmente eram isolados diferentes. Os isolados testados em casa de vegetação foram capazes de nodular a cultivar comercial BR 1. A coinoculação com bactérias não rizobianas pode ter favorecido alguns isolados, em sua eficiência simbiótica, principalmente no acúmulo de N nas plantas. Estes resultados subsidiarão estudos para futuras avaliações dos isolados selecionados na recomendação de inoculantes de espécies nativas para a cultura do amendoim. O amendoim cultivado e as espécies silvestres avaliadas podem estabelecer associações simbióticas com estirpes nativas de rizóbios com elevada diversidade e eficiência simbiótica.