Avaliação in vitro dos efeitos da Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan sobre fatores de virulência de Candida albicans, modulação da interação Candida-hospedeiro e regulação da atividade imunomodulatória - Maia, Carolina Medeiros de Almeida (2020)
OBJETIVO: Este estudo avaliou in vitro a atividade do extrato das cascas de Anadenanthera colubrina (Vell.) Brenan sobre Candida spp., seus efeitos sobre fatores de virulência de Candida albicans, modulação da resposta imune através da interação C. albicans-hospedeiro e regulação da atividade anti-inflamatória. MATERIAL E MÉTODO: A atividade antifúngica foi avaliada Método de Microdiluição em Caldo sobre cepas referências de espécies de Candida (C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. dubliniensis). O efeito anti-biofilme foi verificado em biofilme maduro de C. albicans e quantificado em Unidades Formadoras de Colônia/mL por peso seco de biofilme (UFC/mL/g). As atividades das enzimas proteinase e da fosfolipase foram determinadas através dos ensaios da azocaseína e da fosfatidilcolina, respectivamente. A citotoxicidade foi analisada em fibroblastos gengivais humanos (HGF ATCC® CRL-2014) e em monócitos humanos (THP-1 ATCC® TIB-202) pelo ensaio de viabilidade Cell Titer Blue. O modelo de cocultura de C. albicans-HGF foi analisado por microscopias eletrônica de varredura (MEV) e de fluorescência, pela expressão gênica das enzimas liberadas pela C. albicans (SAP-1, PLB-1) e das citocinas inflamatórias do hospedeiro (IL-6, IL-8, IL-1β, IL-10) avaliadas por RT-PCR, e pela liberação das citocinas, analisada por Luminex. O modelo de inflamação foi induzido através da exposição de monócitos THP-1 ao LPS (Lipopolissacarídeo), com determinação da expressão gênica e dos níveis de citocinas inflamatórias liberadas (IL-8, IL-1β e IL-10) através de RT-PCR e Luminex, respectivamente. A identificação da expressão das proteínas-chave das vias de transduções de sinais NF-κB e MAPK (NF-κB, p-38, p-NF-κB e p-p38) foi avaliada através de Simple Western (WES Simple). A caracterização do perfil fitoquímico do extrato foi realizada por HPLC-ESI-MSn (High-Performance Liquid Chromatography with Electrospray Ionization Mass Spectrometric) e LC-HRESIMS (High Resolution Electrospray Ionization Mass Spectrometry). RESULTADOS: O extrato apresentou efeito fungistático com CIM < 15,25 µg/mL sobre as linhagens de Candida testadas. O biofilme e a atividade proteolítica de C. albicans foram significativamente reduzidos na concentração de 312,25 µg/mL do extrato. Para o ensaio de viabilidade celular, o extrato apresentou LD50 = 423,3 µg/mL para a linhagem de HGF, e LD50 = 978,7 µg/mL para a de monócitos. As microscopias da cocultura revelaram redução substancial no crescimento de C. albicans com toxicidade mínima sobre as células do hospedeiro. As expressões gênicas de SAP-1/PLB-1 foram significativamente infrarreguladas e a resposta imune do hospedeiro frente à infecção por C. albicans foi modulada por uma diminuição significativa na secreção das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e IL-8. Diante do estímulo por LPS, a expressão gênica e a liberação das citocinas IL-1β e IL-10, foram infra e suprarreguladas pelo extrato, respectivamente. O extrato apresentou envolvimento nas vias NF-κB/MAPK relacionadas à ativação de TLR4 (Toll Like Receptor-4), através da fosforilação de NF-κB e p38, com sinal de intensidade reduzidos. O extrato de A. colubrina por si só não induziu resposta inflamatória. A análise fitoquímica apresentou perfil fenólico, constituído predominantemente por flavonóides, catequinas, procianidinas e taninos. CONCLUSÃO: O extrato de A. colubrina apresentou atividade antifúngica frente a cepas de Candida, baixa citotoxicidade, efeito antibiofilme e antiproteolítico sobre C. albicans, com efeitos reguladores sobre a resposta imune do hospedeiro frente à infecção e atividade anti-inflamatória.