Relação entre a superexpressão do receptor do fator de crescimento epitelial humano (HER-2) e estresse oxidativo em pacientes portadoras do câncer de mama - Victorino, Vanessa Jacob (2024)
Resumo: Introdução e objetivos: O câncer de mama é o tumor maligno mais letal em mulheres em todo o mundo, e durante o seu desenvolvimento, cerca de 2% dos pacientes apresentam superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico humano-2 (HER2/neu, também conhecido como ErbB2) A família HER2 abrange quatro outros membros presentes na membrana celular como dímeros: HER1, HER2, HER3 e HER4 HER2 pode dimerizar com outro HER2 ou com HER1, HER3 ou HER4 A superexpressão desses receptores possuem sinalização prolongada e através de diferentes vias de sinalizações podem mediar diferentes fatores transcricionais que culminarão em diminuição de apoptose, aumento da sobrevivência celular, aumento da migração celular, progressão do tumoral, crescimento e síntese de proteínas, estimula proliferação e progressão do ciclo celular Assim, a presença da superexpressão de HER2 no tecido mamário canceroso está associado com a malignidade do tumor Estudos in vitro na literatura sugerem que a estimulação de HER2 minimiza o estresse oxidativo reduzindo os danos a estruturas celulares e algumas das vias ativadas por HER2 podem ser mediadas por produtos do estresse oxidativo e espécies reativas de oxigênio Sabe-se que o estresse oxidativo pode ser modulador, onde o estresse oxidativo moderado pode estimular a proliferação celular enquanto estresse oxidativo alto pode levar a morte celular Assim, HER2 super-expresso pode desempenhar um papel protetor para o tumor contra danos mediados pelo estresse Tais constatações são baseadas na relação indireta entre mediadores do estresse oxidativo e HER2 obtidas por estudos in vitro e a influência da superexpressão de HER2 em parâmetros oxidante/ antioxidante em humanos permanece desconhecida Neste trabalho objetivamos investigar o perfil pro/ antioxidante em mulheres portadoras de tumor HER2 positivo Pacientes e Métodos: Este estudo foi aprovado pelo Conselho Nacional de Pesquisa e Ética (CAAE 9268-7) e pacientes assinaram consentimento informado As mulheres foram divididas em controles saudáveis (52) pareados por idade e mulheres com câncer de mama (52- BC) O grupo BC foi dividido em 3 mulheres negativas para presença de HER2 (HER-) e 22 mulheres positivas para presença de HER2 (HER+) determinada por imunohistoquímica (IHC) empregando o método da estreptavidina-biotina ou hibridização fluorescente in situ (FISH) para IHC 2+ Critérios de exclusão foram fumantes, consumidores de álcool, usuários de suplementos antioxidantes, gravidez, lactação, o excesso de praticas de exercícios físicos, usuários de terapia de reposição hormonal e com outras doenças crônicas Caracterizações dos pacientes incluíram idade no momento do diagnóstico, classificação TNM (T = tumor, N = linfonodo, M = metástase), grau histológico do tumor, receptores hormonais (receptores de estrógeno - ER, receptores de progesterona - PR) e tratamento de quimioterapia O sangue dos participantes foi coletado no Departamento de Patologia Geral, Universidade Estadual de Londrina, PR-Brasil e centrifugado para obtenção de hemácias (RBC) e plasma Análises bioquímicas foram realizadas em amostras de plasma para avaliar danos cardíacos, renais e hepáticos através da medição de creatina-quinase total (CKT) e fração MB (CKMB), uréia, creatinina, aspartato-aminotransferase (AST), alanina-aminotransferase (ALT), gama -glutamil transpeptidase (GGT) e bilirrubina total Para avaliação do metabolismo do ferro, ferritina e ferro plasmático foram mensurados Níveis de 4 ácido úrico também foram avaliados Para avaliar o estresse oxidativo em amostras de RBC e plasma, um método baseado em quimiluminescência foi empregado (QL) Os níveis de malondialdeído (MDA) foram determinados através de um novo método padronizado em cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) Níveis plasmáticos de 8-isoprostano F2 livre foram quantificados utilizando um kit imunoenzimático competitivo após a hidrólise alcalina de ésteres isoprostanos por reação ELISA (do inglês, Enzime Linked Immuno Assay Sorbent) Avaliação dos níveis de nitrito como estimativa de óxido nítrico (NO) plasmatico foi estimado empregando o sistema de reação cádmio-cobre-Griess O conteúdo de proteínas carboniladas foram avaliadas pelo método da dinitrofenilhidrazina (DNPH) Para avaliar o perfil antioxidante, capacidade antioxidante total (TRAP) foi realizada por QL Nós também determinamos a atividade da ezima superóxido dismutase (SOD) através do método de inibição da auto-oxidação do pirogalol e determinamos a atividade da enzima catalase através do método de avaliação da degração do peróxido de hidrogênio Os níveis de glutationa reduzida (GSH) foram determinados através do método de reação com 5, 5 '- dithiobis - 2 - ácido nitrobenzóico (DTNB) Todas as análises foram realizadas em triplicatas Análise estatística foram realizadas utilizando GraphPad Prism versão 5 (GraphPad Software, San Diego, CA), Microsoft Office Excel 27 e OriginLab software 8 Os resultados foram expressos como média aritmética e erro padrão das médias (SEM) Diferenças entre os grupos foram avaliados por análise de variância Two-Way (Two-Way ANOVA) para as curvas de peroxidação lipídica, com teste de Bonferroni como pos-hoc, qui-quadrado e teste exato de Fisher para dados clinicopatológicos, e teste t de Student não pareado ou Mann-Whitney para outros parâmetros Todos os dados foram verificados no Software GraphPad para eliminar outliers significativos (p< 5) As diferenças foram consideradas estatisticamente significantes quando p < 5