Atividade hemolítica e hemaglutinante de células viáveis e antígenos solúveis de Paracoccidioides spp. sobre eritrócitos humanos - Santos, Fernando Cezar dos (2024)
Resumo: Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica endêmica na América Latina, é causada pelos fungos termodimórficos P brasiliensis e P lutzii A atividade hemolítica tem sido considerada um importante fator de virulência em diversos patógenos e tem sido detectada com células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade hemolítica e hemaglutinante de células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii e seus antígenos solúveis Inicialmente, células viáveis de P brasiliensis (Pb339) e P lutzii (LDR2) e seus antígenos livres de células (CFA) nativos ou aquecidos, em diferentes concentrações (11, 2, 3, 4, 5, 6,7 células/ml e 15; 75; 37 e 18 mg proteina/ml, respectivamente) foram submetidos ao teste de hemólise Adicionalmente, os componentes solúveis de cultura dos fungos em meios sólidos, CFA (Saboraud com ou sem BHI) e sobrenadantes de cultura dos fungos (ExoAgs) em meios líquidos (RPMI, BHI), coletados a cada três dias por um período de 3 dias também foram avaliados O teste de hemólise foi realizado em placas de 96 poços com eritrócitos humanos (1%) à 37ºC (3 hrs e 5 hrs) e o grau de hemólise foi avaliado por espectrofotometria no comprimento de onda de 55 nm A atividade hemolítica foi observada em ambos os fungos na concentração de 17 células/poço e foi maior com LDR2 quando comparado ao Pb339 (p<,5) Em contraposição, CFA de Pb339 apresentou maior atividade hemolítica que CFA de LDR2 (p<,5) Em ambos, a atividade hemolítica do CFA foi maior em 5 hrs do que em 3 hrs de incubação e também quando a maior concentração foi usada Surpreendentemente, foi também detectada atividade hemaglutinante com ambos os fungos em concentrações menores (16,15,14) Essa hemaglutinação foi detectada em CFA diluído e aquecido de Pb339 ou CFA de LDR2 aquecido, mas não diluído O perfil hemolítico foi similar com antígenos solúveis de Pb339 obtidos de meios sólidos e líquidos, com atividade máxima começando em 9-12 dias de cultura, que foi mantida até a avaliação final No entanto, somente antígenos solúveis de LDR2 crescidos em meio Saboraud apresentaram alta atividade hemolítica nos dias 15-18, que então decresceu Todas as outras fontes de LDR2 apresentaram atividade diminuída durante todos os períodos de cultura avaliados Em conclusão, células leveduriformes de P brasiliensis e P lutzii possuem a habilidade de lisar e aglutinar eritrócitos humanos, mas possivelmente Pb339 é mais eficaz em liberar esse fator em forma solúvel e tanto tempo quanto condições de cultura afetam a produção de fatores hemolíticos