Caracterização parcial de fator(es) hemolítico(s) de Arthrographis kalrae - Nagashima, Luciene Airy (2024)
Resumo: No presente estudo, componentes solúveis de Arthrographis kalrae foram investigados em relação à imunogenicidade/antigenicidade e atividade hemolítica Para avaliação da imunogenicidade/antigenicidade, o estudo foi realizado utilizando cell-free antigens (CFA) e antígenos sonicados e anticorpos anti-CFA de coelho por imunodifusão (ID)/ELISA/western blotting e também análise de frações cromatográficas de Sephadex G-1 e G-2 por ELISA A atividade hemolítica foi estudada em duas etapas: na primeira foram utilizadas hemácias de carneiro e, na segunda, hemácias de camundongo e anticorpos de camundongo anti-CFA e anti-hemácia de camundongo sensibilizada com CFA (anti-He-CFA) Na segunda etapa, amostras de CFA na forma nativa, CFA aquecido (56 oC, 3 min) ou tratado com anti-He-CFA e as frações obtidas por cromatografia de CFA em coluna de Sephadex G-2, foram analisadas pelo teste de hemólise Adicionalmente, a reatividade de anti-He-CFA e anti-CFA com antígeno CFA foi analisada por ELISA utilizando frações de cromatografia de G-2 ou por western blotting Os resultados da primeira etapa demonstraram um pico de reatividade das frações de CFA em Sephadex G-1 e dois picos de reatividade em Sephadex G-2 com soro imune de coelho Os resultados de western blotting mostraram que anti-CFA de coelho reconheceram várias bandas com MM distintas, sendo o perfil diferenciado em relação ao preparado antigênico A análise de atividade hemolítica resultou em lise das hemácias de carneiro Utilizando eritrócitos de camundongo foi observada atividade lítica similar com CFA na forma nativa e CFA aquecido, e diminuição da atividade com amostras de CFA tratadas com anti-He-CFA, sugerindo especificidade dos anticorpos aos fatores responsáveis pela hemólise Atividade hemolítica foi observada nas frações obtidas por cromatografia em Sephadex G-2, também positivas com IgG de camundongo anti-He-CFA por ELISA Western blotting resultou em duas bandas principais com MM ~252 kDa e ~79 kDa reconhecidas por IgG de camundongo anti-He-CFA Conclui-se que o fungo A kalrae libera pelo menos dois componentes principais com antigenicidade, imunogenicidade e atividade hemolítica, os quais são termoestáveis e com MM > 2 kDa e ~79 kDa