Efeito da adição de antioxidantes no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos - Gomes, Roberta Garbelini (2024)
Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos da adição dos antioxidantes ácido ascórbico ou ácido alfa lipoico no cultivo in vitro de foliculos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos, por 2 ou 6 dias Em cada um dos experimentos, foram coletados 5 ovários (n = 5) oriundos de 5 éguas em anestro estacional de abatedouro local Os fragmentos ovarianos (experimento 1: ácido ascórbico) e os ovários (experimento 2: ácido alfa lipoico) foram transportados em PBS suplementado com estreptomicina (2 mg/mL) e penicilina (2 UI/mL) a 4º C por uma hora Os fragmentos (n = 9) obtidos da porção mais interna do tecido ovariano de cada animal pesavam 125 a 135 mg, medindo 5 x 5 x 1 mm Um dos fragmentos foi imediatamente fixado em Bouin (Controle; MEM-D) e os outros fragmentos foram cultivados por 2 (D2) ou 6 dias (D6) em MEM suplementado (MEM+) ou MEM+ acrescido de 3 diferentes concentrações de ácido ascórbico (25, 5 ou 1 µg/mL) ou ácido alfa lipoico (5, 1 ou 25 µM) Ao término do cultivo in vitro, todos os fragmentos obtidos foram submetidos à avaliação histológica através de coloração de PAS Os fragmentos obtidos no experimento 2 também foram submetidos à avaliação da atividade proliferativa das células da granulosa através de imunohistoquímica utilizando o marcador antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) Todos os folículos pré-antrais encontrados foram classificados de acordo com seu estágio de desenvolvimento em primordial ou em desenvolvimento (primário e secundário) e também quanto à sua morfologia, em normal ou degenerado Para a imunohistoquímica, os folículos também foram classificados em PCNA-positivo (pelo menos uma célula da granulosa corada) e PCNA-negativo (nenhuma coloração) Os dados obtidos no experimento 1, foram analisados através do teste de Kruskal-Wallis e no experimento 2, através do teste Exato de Fisher, ambos com nível de significância de 5% (p < ,5) No experimento 1, foram analisados 47 folículos e 43,5% apresentaram-se morfologicamente normais Os tratamentos MEM+, 25, 5 e 1 µg/mL no dia 2 de cultivo in vitro apresentaram resultados similares quanto à porcentagem de folículos em desenvolvimento Os tratamentos MEM+ adicionado de 5 ou 1 µg/mL de ácido ascórbico apresentaram maiores porcentagens de folículos em desenvolvimento que primordiais comparado aos demais grupos testados no dia 6 de cultivo in vitro (p < ,5) No experimento 2, foram analisados 195 folículos (767 folículos através de histologia e 328 através de imunohistoquímica) Dos 767 folículos analisados através de histologia, 56,3% apresentaram-se morfologicamente normais O grupo MEM+ apresentou maior porcentagem de folículos em desenvolvimento (88,2%) que primordiais, diferindo dos demais grupos no dia 2 de cultivo in vitro (p < ,5) O grupo MEM+ acrescido de 5 µM de ácido alfa lipoico, mostrou melhores resultados comparado aos demais tratamentos no dia 6 do cultivo in vitro (p < ,5), com 1% dos folículos em desenvolvimento e PCNA-positivo Pode-se concluir que o cultivo por 6 dias de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos oriundos de abatedouro em MEM+ acrescido de 5 ou 1 µg/mL de ácido ascórbico ou MEM+ acrescido de 5 µM de ácido alfa lipoico, permitiu o desenvolvimento folicular