Identificação de genes cry e vip do isolado Bacillus thuringiensis BR37 por sequenciamento genômico - Silva, Kelly Christiane Constanski (2024)
Resumo: Uma alternativa ao uso de inseticidas sinteticos é o uso de produtos biológicos como a bactéria B thuringiensis caracterizada pela produção de proteínas tóxicas a diversas ordens de insetos, as quais são codificadas por genes cry, vip e cyt Este trabalho teve o objetivo de caracterizar molecularmente e sequenciar o isolado BR37, que, em testes anteriores apresentou atividade tóxica frente às espécies da ordem Lepidoptera Amostras de DNA desse isolado foram usadas para reações de amplificação por PCR, visando à identificação dos genes cry1, cry2, cry3, cry4A, cry4B cry1, cry11 e cyt1, utilizando iniciadores específicos Foi possível através dessa técnica identificar a presença dos genes cry1 e cry2 O perfil proteico dos cristais desse isolado foi determinado por SDS-PAGE, onde verificado massas moleculares correspondentes a proteínas de 65e 13 kDa correspondentes as genes cry1 e cry2 respectivamente Em microscopia eletrônica de varredura foi possível verificar cristais esféricos e bipiramidais, os quais podem estar relacionados à toxicidade a insetos da Ordem Lepidoptera e Coleoptera O sequenciamento do DNA genômico foi realizado pela plataforma Ion Torrent, e as sequências obtidas foram analisadas, filtrando as leituras de baixa qualidade, visando a identificação de sequências correspondentes aos genes cry, vip e cyt de referência depositados no banco de dados GeneBank Através do sequenciamento foi possivel obter as subclasses para os genes identificados em PCR: cry1Aa16, cry1Ab15, cry1Ad1, cry1Ca9, cry1Da3, cry1Eb1, cry1Fa1, cry2Aa13 e também um gene ainda não identificado o vip3Ca2 O isolado BR37 apresenta potencial para ser utilizado como fonte de genes cry e vip no desenvolvimento de bioinseticidas e plantas geneticamente modificadas