Atividade antitumoral in vitro do 3,3’,5,5’-tetrametoxibifenil-4,4’-diol sobre as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A de carcinoma hepatocelular humano - Inoue, Fabricio Seidy Ribeiro (2022)
Dentre os cânceres hepáticos primários, o carcinoma hepatocelular (CHC) é o mais incidente e agressivo, apresentando apenas 18% de sobrevida em 5 anos, baixa responsividade e recorrente resistência à quimioterapia devido a heterogeneidade molecular encontrada nos tumores. Neste contexto, a utilização de compostos fenólicos como alternativa terapêutica para o câncer tem sido o foco de muitos estudos devido às suas propriedades biológicas como antimutagenicidade, anti-inflamatória e antiproliferativa. O 3,3’,5,5’-tetrametoxibifenil-4,4’-diol (TMBP) é um composto biossintético obtido através da oxidação do 2,6-dimetoxifenol por meio da biotransformação enzimática. Em estudos prévios utilizando o TMBP, foi demonstrado sua capacidade antiproliferativa sobre a linhagem A549 (adenocarcinoma pulmonar). O presente trabalho propôs explorar a atividade antitumoral do TMPB sobre as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A (CHC), assim como os mecanismos de morte celular envolvidos. Inicialmente, foi avaliada a viabilidade celular das linhagens tratadas com o TMBP (12,5–150 µM) nos tempos de 24 e 48h por ensaio de MTT. Posteriormente foram calculadas as concentrações inibitórias mínimas de 50% (IC50), utilizadas para os experimentos seguintes. Para a confirmação do ensaio de viabilidade, foi realizado contagem através do método de exclusão azul de tripan. Para a análise dos efeitos celulares foram avaliadas as alterações morfológicas, ultraestruturais e capacidade de migração celular por microscopia eletrônica e ensaio de cicatrização de ferida. Como forma de avaliar as alterações metabólicas após tratamento com IC50 foram mensuradas espécies reativas de oxigênio (ERO) total for fluorescência, utilizando a sonda de diacetato de 2’,7’-diclorohidrofluoresceína (H2DCFDA), óxido nítrico (NO) pelo método de Griess, potencial de membrana mitocondrial, vacúolos autofágicos e gotículas lipídicas por métodos de fluorescência utilizando as marcações tetrametilrodamina (TMRE), monodansilcadaverina (MDC) e vermelho neutro (NR), respectivamente. A distribuição do ciclo celular também foi avaliada, juntamente com o ensaio de caracterização de morte celular por citometria de fluxo. O tratamento com TMBP reduziu a viabilidade celular em todas as concentrações testadas, chegando aos valores de IC50 de 68 e 50 µM em 24h para as linhagens HuH7.5 e HepG2/C3A, respectivamente, os quais foram utilizados para os seguintes experimentos. As células tratadas apresentaram migração comprometida, além de severas alterações morfológicas. O tratamento induziu aumento nos níveis de ERO e NO, despolarização da membrana mitocondrial e ativação de mecanismos de adaptação, como aumento da biosíntese de gotículas lipídicas e vacúolos autofágicos em ambas as linhagens, tais alterações foram validadas através das alterações ultraestuturais. Além disso o tratamento com TMBP promoveu similarmente nas duas linhagens a parada do ciclo celular na fase G2/M, e induziu a morte celular por apoptose. Desse modo, foi possível verificar a ação citotóxica e antiproliferativa direta do TMBP sobre as linhagens tumorais, indicando este composto como um candidato promissor ao desenvolvimento de uma droga antitumoral